DB23T 3896—2024玉米穗腐病抗源鉴定及评价技术规程.docx

ICS65.020.20

CCSB16DB23

黑龙江省地方标准

DB23/T3896—2024

玉米穗腐病抗源鉴定及评价技术规程

2024-12-30发布2025-01-29实施

黑龙江省市场监督管理局发布

DB23/T3896—2024

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由黑龙江省农业农村厅提出并归口。

本文件起草单位：黑龙江省农业科学院玉米研究所、东北农业大学、中国农业科学院作物科学研究所。

本文件主要起草人：扈光辉、杨剑飞、朴琳、李永刚、李春辉、李国良、王明泉、付立新、胡少新、王志国。

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DB23/T3896—2024

玉米穗腐病抗源鉴定及评价技术规程

1范围

本文件规定了玉米穗腐病抗源鉴定及评价技术的接种体制备、抗病性鉴定圃设置、接种、病情调查和抗病性评价等要求。

本文件适用于玉米种质资源对玉米镰孢穗腐病的田间抗性鉴定和评价。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅注日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB4404.1粮食作物种子第1部分：禾谷类

NY/T1248.8玉米抗病虫性鉴定技术规范第8部分：镰孢穗腐病DB23/T2154玉米机械化籽粒收获栽培技术规程

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。3.1

玉米穗腐病抗源鉴定identificationofresistancesourcetomaizeearrot

利用玉米禾谷镰孢（Fusariumgraminearum）、拟轮枝镰孢（Fverticillioides）、亚粘团镰孢（F.subglutinans）、层出镰孢（F.proliferatum）穗腐病混合菌进行人工接种，鉴定挖掘抗穗腐病种质资源。

4接种体制备

4.1镰孢病原菌分离与致病力测定

4.1.1病原菌分离

取发生穗腐病的玉米籽粒，置于75%的酒精中浸泡2s～3s，取出后置于浓度为1.5%的次氯酸钠中浸泡3min～5min，再经无菌水换洗3次，晾干后用无菌剪刀从中间剪开后将其中一块组织转移至PDA平板培养基上，置于25℃~27℃环境中，黑暗培养3d后挑取病原菌至试管中保存。

4.1.2致病力测定

采用根部接种法根据柯赫氏法则验证所分离的镰孢菌为穗腐病原菌，并确定其具有一定的致病能力。

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4.2镰孢病原菌鉴定

采用形态学和分子生物学技术确定目标病原菌的所属种为禾谷镰孢、拟轮枝镰孢、亚粘团镰孢、层出镰孢。具体鉴定方法按NY/T1248.8的规定执行。

4.3病原菌的配制

4.3.1培养基的制备

将高粱粒（125g）在沸水中煮20min，然后转移到250mL三角瓶中，121℃湿热灭菌

45min，完成高粱粒培养基的制备。

按照NY/T1248.8提供的方法制备马铃薯葡萄糖琼脂培养基（Potatodextroseagarmedium，PDA）。

4.3.2禾谷镰孢孢子悬浮液的配制

将禾谷镰孢转移至PDA培养基上培养，挑取3个～5个扩繁的禾谷镰孢的菌碟转移到0.9%～1.5%的无菌盐水中，每100mL三角瓶装液量为15ml，28℃~30℃、可见光150lx~200lx条件下摇床震荡（150rpm～180rpm）培养96h～120h，双层纱布过滤后用血球计数法调整孢子悬浮液浓度为2×106孢子/mL，4℃条件下可保存96h。

4.3.3拟轮枝镰孢孢子悬浮液的配制

将PDA培养基扩繁7d后的拟轮枝镰孢5个菌碟转移至装有无菌高粱粒的三角瓶中，并在26℃、避光条件下培养5d，每天摇晃一次三角瓶，然后用无菌水冲洗带菌高粱粒，双层纱布过滤后用血球计数法调整孢子悬浮液浓度为2×106孢子/mL，4℃条件下可保存96h。

4.3.4亚粘团镰孢孢子悬浮液的配制

将PDA培养基扩繁7d后的亚粘团镰孢5个菌碟转移至装有无菌高粱粒的三角瓶中，并在26℃、避光条件下