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每代细胞
滞留期lagphase传代:恢复期
适应期
原代培养:开始时细胞
必须经历的时期概述01分散细胞接种:游离--
吸附--潜伏期
组织块:潜伏期2种情况02
滞留期01原因:02操作时,细胞表面上与其它细胞及支持物03黏附与连接的分子被破坏,细胞受到损伤04接种细胞:05适应,恢复,积累(代谢中间产物)06组织块:07细胞迁移出08一般经数小时--几天09
滞留期过程:
游离:悬浮,胞质回缩,
全部细胞变为圆球形
吸附:贴附底物,一般24小时内
贴壁
潜伏期:可有运动活动,基本无增殖,
少见分裂相
滞留期影响因素
滞留期的长短与细胞种类、按种的细胞密度、培养条件等因素有关。
1.细胞密度
接种分散细胞,接种的密度越大、数量越多,
细胞群体越容易适应体外环境,潜伏期就短。
相反,即便是在很小的培养空间内,
如接种的细胞数量不够大,潜伏期仍会较长
滞留期-影响因素01细胞类型02传代培养的细胞之滞留期03比原代培养的细胞短。04单个细胞快,细胞大团慢,组织块慢05连续细胞系与发生恶性转化的细胞06比有限细胞系与正常二倍体细胞的短07来源08胚胎组织:短,09成体:长10
滞留期-影响因素1细胞机能状态
不良者慢2培养条件
培养液,pH,底物
不利:污染,有毒3
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指数生长期
exponential(log)phase即开始指数生长期,或称对数生长期。各种营养条件具备后进入细胞生长所需潜伏期结束后概述
是细胞增生最活跃、活力最旺盛的阶段01培养物中细胞数量呈指数增长,02细胞群体均一03实验理想04判断细胞生长的指标05特点
判断细胞生长的指标
指数生长期内细胞分裂活动的程度(增殖活性)
可作为判断细胞生长是否旺盛的重要指标1.有丝分裂指数(MI):培养物中分裂相数量占
全部细胞数量的百分比
统计时,每瓶至少需计数1000个细胞。
一般细胞的MI约为0.1~0.5%
原代培养物的MI比继代培养物低。
连续细胞系和肿瘤细胞高,可达3%~5%。2.细胞群体倍增时间:
培养物中细胞数量翻倍的平均时间
间接反映细胞活力和增殖活动强弱,有MTT法:
反映细胞内一种酶活性程度标记核苷酸(3H-TdR)掺入量:
反映DNA合成细胞的增殖活性与细胞种类、供体年龄以及培养条件等多种因素密切相关。
细胞生长一定阶段(指数生长期一般持续3~5d),即可
长满培养器皿,相互汇合成片
(铺满confluence汇合)铺满:细胞彼此连接成层长满器皿底壁。(细胞相互之间紧密接
触,所有可供生长的区域己被利用)。
正常细胞(非转化细胞),当细胞相互接触
连接成片,出现接触抑制
接触抑制以后,虽然运动受抑制,
但只要营养成分充足,仍可短期的分裂增殖
只有当细胞密度增大到一定程度,
细胞便不再分裂增殖。
为密度依赖性细胞生长抑制当细胞分裂停止后,细胞数量即不再增加
进入平台期
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