高致病性禽流感诊断技术及人员防护技术规范(2025年版).docx

研究报告

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高致病性禽流感诊断技术及人员防护技术规范(2025年版)

一、总则

1.1适用范围

(1)本规范适用于全国各级兽医行政管理部门、动物疫病预防控制机构和动物诊疗机构等开展高致病性禽流感诊断工作。在禽流感疫情发生时，本规范为疫情处置和防控提供技术指导。

(2)高致病性禽流感诊断技术及人员防护技术规范涵盖了禽流感病毒的样本采集、实验室检测、病毒分离鉴定、基因检测、抗体检测、分子流行病学调查以及人员防护等多个方面，旨在提高禽流感诊断的准确性和效率，确保实验室生物安全。

(3)本规范适用于从事禽流感诊断和防控工作的专业人员，包括兽医、检验员、流行病学家、实验室技术人员等。通过遵循本规范，能够确保诊断结果的准确性和可靠性，为禽流感疫情的防控提供科学依据。同时，规范还强调了人员防护的重要性，以降低实验室感染风险，保障工作人员的健康安全。

1.2术语和定义

(1)高致病性禽流感：指由A型禽流感病毒引起，对家禽和野禽具有高度致病性和高死亡率的一类禽流感。该病毒可感染多种禽类，包括鸡、鸭、鹅、鸽子等。

(2)禽流感病毒：一类属于正黏病毒科禽流感病毒属的病毒，具有包膜，基因组为单股负链RNA。禽流感病毒根据其血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）蛋白的抗原性不同，可分为多个亚型。

(3)样本采集：指在禽流感疫情发生或疑似发生时，按照规定程序和方法，从感染动物或其环境中采集可能含有禽流感病毒的样本，如咽拭子、粪便、血液、组织等。样本采集是诊断工作的基础，直接关系到诊断结果的准确性。

1.3规范性引用文件

(1)《中华人民共和国动物防疫法》：规定了动物防疫的基本制度、措施和法律责任，是动物防疫工作的法律依据。

(2)《高致病性禽流感防治技术规范》：详细阐述了高致病性禽流感的诊断、预防和控制措施，为禽流感防控提供了技术支持。

(3)《实验室生物安全通用要求》：规定了实验室生物安全的通用要求，包括实验室的设置、设备、操作程序、废弃物处理等，旨在防止实验室感染和生物安全事件的发生。该规范适用于所有从事生物实验活动的实验室。

二、诊断技术

2.1样本采集

(1)样本采集是禽流感诊断工作的第一步，采集过程中应严格按照操作规程进行，确保样本的完整性和代表性。采集时，应选择合适的采样时间，通常在病禽出现症状后的1-3天内进行，以获取较高浓度的病毒。

(2)样本采集地点应选择在禽舍内，避免外界环境因素的干扰。采集时，工作人员应穿戴适当的防护用品，如防护服、口罩、手套等，以防交叉感染。采样工具应无菌，采样过程中应避免污染。

(3)样本采集方法根据不同类型和部位有所不同。对于活禽，可通过咽拭子、鼻拭子、粪便、泄殖腔拭子等方式采集；对于死禽，可采集气管、肺、肝脏、脾脏等组织。采集后的样本应立即装入无菌容器中，并做好标记，以备后续检测和分析。

2.2实验室检测方法

(1)实验室检测方法主要包括病毒分离、分子生物学检测和免疫学检测。病毒分离是传统的诊断方法，通过将样本接种于易感动物或细胞培养物中，观察病毒生长情况。分子生物学检测主要采用聚合酶链反应（PCR）技术，快速、准确地检测禽流感病毒核酸。免疫学检测则通过检测禽流感病毒抗原或抗体，辅助诊断。

(2)病毒分离实验通常在生物安全二级实验室进行，需使用无菌操作技术。将采集的样本接种于鸡胚或细胞培养物中，观察病毒生长情况，如出现细胞病变或病毒滴度升高，可初步判定为禽流感病毒感染。随后，通过血凝试验和血凝抑制试验进一步鉴定病毒亚型。

(3)分子生物学检测方法中，PCR技术是最常用的检测手段。通过设计特异性引物，扩增禽流感病毒的特定基因片段，检测病毒核酸。此外，实时荧光定量PCR技术可实时监测扩增曲线，提高检测灵敏度和特异性。免疫学检测方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）和间接免疫荧光试验（IFA），通过检测病毒抗原或抗体，辅助诊断禽流感。

2.3结果判定

(1)禽流感诊断结果判定主要依据实验室检测数据和临床症状。对于病毒分离，若观察到细胞病变或病毒滴度显著升高，结合病毒鉴定结果，可判定为禽流感病毒感染。分子生物学检测结果中，若检测到禽流感病毒核酸，且排除其他相关病毒感染，也可判定为禽流感病毒感染。

(2)在免疫学检测方面，ELISA和IFA等技术可检测禽流感病毒抗原或抗体。若抗体检测结果显示抗体水平显著升高，且排除其他因素导致的假阳性，可判定为禽流感感染。若抗原检测结果显示病毒抗原存在，也可判定为禽流感病毒感染。

(3)综合实验室检测结果和临床症状，进行综合分析，以确定禽流感的诊断结果。在疑似病例中，若实验室检测结果为阳性，且临床症状与禽流感相符，可初步判定为禽流感。在确诊病例中，需多次检测，确保结果的一致性。在排除其他疾病和病原体感染的情况下，最终确定禽流