霍乱弧菌实验室检测.ppt

第1页，共21页，星期日，2025年，2月5日什么是霍乱?霍乱是由01群和0139群霍乱弧菌（V．cholerae）引起的急性肠道传染病，发病急、传播速度快、波及范围广、危害严重的甲类传染病。霍乱概述古典生物型小川型Ogawa(AB)O1群稻叶型Inaba(AC)埃尔托生物型彦岛型Hikojim(ABC)霍乱弧菌霍乱病原菌O139群（Bengal）非O1群O2-O200群腹泻病原菌第2页，共21页，星期日，2025年，2月5日病原体O1群，O139群霍乱弧菌发病特征：剧烈腹泻、呕吐、严重脱水时致酸中毒、循环衰竭而致死亡不治疗或医疗很差的条件下病死率可达到20－50％（重症病人达70－100％）培养特性：营养要求不高，兼性厌氧，37℃生长，怕酸嗜碱，pH:7.4-9.6快速生长检验依据：WS289-2008《霍乱诊断标准》霍乱防治手册（1999年第五版）第3页，共21页，星期日，2025年，2月5日霍乱的实验室检测样品的采集和运输不同样品的病原分离流程及技术要点?粪便?水体?水产品，食品等平板分离及可疑菌落挑取菌落鉴定常用快速检测方法?胶体金检测条?荧光PCR检测检测工作中应关注的事项第4页，共21页，星期日，2025年，2月5日样品的采集和运输采集：?病例：粪便、肛拭子、呕吐物未使用抗生素之前“健康”人：粪便、肛拭子其他传播环节的标本：食物、水、环境类样品……?监测：水样，水产品等运输：一般要求在3小时内室温（20-25℃）条件下送达实验室检测?C-B运输培养基（pH8.4）;（或文腊二氏保存液）?碱性蛋白胨水（pH8.4-9.2）：不是最佳的，尤其6小时内还不能进行培养时，尽量采用C-B运输培养基。第5页，共21页，星期日，2025年，2月5日粪便的采集与保存运送以采集病人自然排除的新鲜粪便为主，水样便采取1～3mL，成形便采取指甲大小的粪量，亦可用直肠棉拭或采便管由肛门插入直肠内3～5cm处采取，采集后的样品应尽快挑取接种于碱性蛋白胨水（ＰＨ8.６-9.2），同时划线分离选择性培养基（庆大／四号／ＴＣＢＳ平板），如不能在６小时内送达实验室检测的样品，应插入Cary-Blair二氏半固体保存培养基（或文腊二氏保存液）中送检。标本与保存液比例约为1∶5。分离培养要点（两管三板法）：?挑取粪便，直接接种于碱性蛋白胨水（第一管）中，同时划线分离选择性平板（庆大／四号／ＴＣＢＳ平板，第一板）。?第一管碱性蛋白胨水在３７℃增菌６－８小时，沾取菌膜下表层液体，划线分离选择性平板（庆大／四号／ＴＣＢＳ平板，第二板），同时吸取0.1～0.2ml表层培养物，接种碱性蛋白胨水（第二管）。?第二管碱性蛋白胨水增菌１８小时后划线分离选择性平板（庆大／四号／ＴＣＢＳ平板，第三板）。粪便分离流程及技术要点第6页，共21页，星期日，2025年，2月5日水体的采集与保存运送水体的采集一般用无菌的500ml水样瓶采集相对静止的表层水(深度为30cm以内)500ml，密封加盖后于室温（20-25℃）3小时内送达实验室检测。分离培养要点（十倍浓缩碱胨水增菌培养法）：