MiR-181a-5p调控HMGB1在BNLCL2细胞凋亡中的作用.pdfVIP

MiR-181a-5p调控HMGB1在BNLCL2细胞凋亡中的作用

摘要

miR-181a-5pHMGB1BNLCL2

目的：探讨调控对细胞凋亡的影响。

1TrgetscanMouse7.2miR-181a-5p2

方法：（）利用数据库对进行靶基因预测。（）分

0nmol5nmol10nmol20nmol40nmolmiR-181a-5p

别以、、、、不同的转染浓度将

mimic转染至BNLCL2细胞中，PCR法检测其对应的miR-181a-5pmRNA表达量，

以获取miR-181a-5pmimic的最佳转染浓度。以最佳转染浓度将miR-181a-5pmimic

转染至细胞，转染0h、3h、6h、12h、24h分别检测miR-181a-5pmRNA表达量，

以获得该模拟物的最佳转染时间。（3）将BNLCL2细胞分为实验组即miR-181a-5p

mimic组（M组）、对照组即miR-NC组（N组），两组应用1mg/mlD-Galn联合

100ng/mlTNF-α诱导建立体外急性肝衰竭细胞模型。建立急性肝衰竭模型24h后，

应用脂质体转染法，M组将miR-181a-5pmimic转染至BNLCL2中，N组将miR-

NC(空载体)转染至BNLCL2中。转染后0h、6h、12h、24h、48h采用qRT-PCR

法检测两组BNLCL2细胞中miR-181a-5p、HMGB1、IL-6、caspase-3mRNA的表

达水平；应用WesternBlot法检测HMGB1、caspase-3蛋白的表达水平；ELISA法

检测IL-6分泌水平；应用CCK-8检测细胞活性。（4）应用GraphPadPrism8统计

学软件进行数据分析，数据用均数±标准差（±s）表示，用单因素方差分析（onex

wayANOVA）进行组间比较。p0.05为差异有统计学意义。

结果：（1）MiR-181a-5p与HMGB1的3’UTR具有结合位点。（2）MiR-181a-5p

mimic的最佳转染浓度是20nmol/L，最佳转染时间是12h。（3）与对照组相比，实

验组各时间点miR-181a-5p表达水平显著增加，HMGB1mRNA及蛋白表达水平显著

下降，炎症因子IL-6mRNA及蛋白表达水平显著下降，caspase-3mRNA及蛋白表达

水平明显下降，细胞存活率提高。差异均具有显著性，p0.05。

结论：MiR-181a-5p可负向调控HMGB1表达，阻断HMGB1信号通路，减少其下

游炎症因子的表达，减轻D-Galn联合TNF-α诱导的细胞凋亡。

硕士研究生：张倩文（消化系病）

指导教师：王立坤（教授）

关键词：RNA干扰；miR-181a-5p；急性肝衰竭；细胞凋亡；HMGB1

I

MiR-181a-5pregulatestheroleofHMGB1intheapoptosisofBNLCL2

cells

Abstract

Objective:ToinvestigatetheeffectofmiR-181a-5pregulationofHMGB1onthe

apoptosisofBNLCL2cells.

Methods:(1)TheTargetscanMouse7.2databasewasusedtopredictthetargetgenesof

miR-181a-5p.(2)DifferenttransfectionconcentrationsofmiR-181a