细胞生物学3细胞生物学研究方法.ppt

ChargedPlatesFluorescenceActivatedCellSorting488nmlaser+-SinglecellssortedintotesttubesFALSSensorFluorescencedetector细胞分选细胞标记染色体分选染色体标记FACSAria科研型特点：分辨率高选配多种波长和类型激光器可把感兴趣细胞分选到特定培养孔或板上（4路和24孔板）适用于高速分选和多色分析12细胞大小细胞粒度细胞表面面积核浆比例DNA含量与细胞周期RNA含量蛋白质含量细胞结构特异性抗原（细胞表面/胞浆/核）细胞内细胞因子细胞活性酶活性激素结合位点细胞受体123细胞功能4流式细胞仪检测范围流式细胞仪的工作原理光学系统激光光源 光收集系统液流系统 流动室液流驱动系统电子系统 光电转换 数据处理系统细胞分选系统细胞工程细胞工程技术是细胞生物学与遗传学的交叉领域，主要利用细胞生物学的原理和方法，结合工程学的技术手段，按照人们预先的设计，有计划地改变或创造细胞遗传性的技术。包括体外大量培养和繁殖细胞，或获得细胞产品、或利用细胞体本身。主要内容包括：细胞融合、细胞生物反应器、染色体转移、细胞器移植、基因转移、细胞及组织培养。细胞融合在自发或人工诱导下，两个不同基因型的细胞或原生质体融合形成一个杂种细胞。基本过程包括细胞融合形成异核体(heterokaryon)、异核体通过细胞有丝分裂进行核融合、最终形成单核的杂种细胞。聚乙二醇（PEG）法细胞融合过程显微镜下细胞融合过程BHK-21细胞用核骨架蛋白抗体进行免疫胶体金标记的结果

IF：中间纤维；g:金颗粒；N:核区STEP4STEP3STEP2STEP1取血----PBS洗三次----滴片(有Formvar膜)----冷的1%戊二醛4度固定2小时-----PBS----1%四氧化锇，30分-----PBS-----50、70、90%丙酮各一次，100%两次----50、70、90%醋酸异戊酯丙酮溶液各一次，100%醋酸异戊酯两次----临界点干燥----喷碳、金—观察外周血血细胞扫描电镜标本的制备人类血细胞SEM照片GFP是从一种生活在北太平洋寒冷水域的水母体内发现的。在蛋白质编号lema中可以看到GFP发色团的骨架在左边。蛋白质链形成一个圆柱形罐头（蓝色），子链的一部分直接从中间穿过（绿色），发色团刚好在罐头盒的中间，它被保护起来以免受周围环境的影响GFP的纯溶液在典型的室光下呈黄色，但是当被拿到户外的阳光下时，它会发出鲜绿的颜色。这种蛋白质从阳光中吸收紫外光，然后以能量较低的绿光形式发射出来。绿色荧光蛋白的应用绿色荧光蛋白是当代科学和医学领域最重要的工具之一，它从显微水平上照亮了生命。随着病毒在宿主体内不断扩散，你就可以通过跟踪发出的绿光来观察病毒的扩散途径，或者你把它接合到一种蛋白质上并通过显微镜观察它在细胞内部的移动科学使用绿色荧光蛋白跟踪大脑神经细胞的发育过程。*Fruitfly:generationtime2weeks;producemanyoffspring;embryodevelopoutsideCelegans:amillimeterlong,transparentbodyonlyafewcelltypes,fromzygotetomatureadultonlyin3.5days.Zebrafish:2-4cm,embryosdevelopoutside,generationtime2-4months,24hrformmostofthetissuesandorgans,2dayshatchesoutoftheegg.Butit’sunclearaboutitsgeneticmap.基因敲除基因敲除示意图（1）基因敲除示意图（2）基因敲除原理KnockoutMice未来的生物技术CaenorhabditiselegansDrosophilamelanogasterArabidopsisthalianaelegansZebrafish基本原理：氯金酸(HAuCl4)在还原剂作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，形成带负电的疏水胶状溶液。由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。胶体金标记：实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的过程。12免疫胶体金技术吸附机理：因胶体金颗粒表面负电荷，与蛋白质的正电