高效液相色谱分离检测技术.ppt

第26页，共37页，星期日，2025年，2月5日关于高效液相色谱分离检测技术第1页，共37页，星期日，2025年，2月5日1、固定相（柱填料）常用填料基质可分为硅胶、氧化物和聚合物。硅胶是HPLC填料中最常用的基质。它具有良好的机械强度、容易控制的孔结构和比表面积、较好的化学稳定性和热稳定性以及专一的表面化学反应等优点外，还有一个突出的优点就是其表面含有丰富的硅羟基，这是硅胶可以进行表面键合或改性的基础。缺点：在碱性水溶性流动相中不稳定。4.4.1液谱分离系统目前市场主要可供选择的硅胶填料粒径1.7μm，1.8μm，2.2μm－快速液相色谱柱：匹配快速色谱仪2.7μm－多孔壳层：在常规液相色谱仪上实现快速分离(Halo)3.0μm，3.5μm－普通快速分析5.0μm－常规分析颗粒越小，柱效越高，但是耐污染性能下降，柱压升高。第2页，共37页，星期日，2025年，2月5日1.液-液分配及离子对分离固定相（1）全多孔型担体氧化硅、氧化铝、硅藻土等制成的多孔球体；早期采用100μm的大颗粒，表面涂渍固定液，性能不佳已不多见。现采用10μm以下的小颗粒，化学键合制备柱填料。（2）表面多孔型担体（薄壳型微珠担体）30～40μm的玻璃微球，表面附着一层厚度为1～2μm的多孔硅胶。表面积小，柱容量底。第3页，共37页，星期日，2025年，2月5日4.4.1液谱分离系统HPLC固定相状态分液-固色谱法（LSC）液-液色谱法（LLC）分离机制分吸附色谱法分配色谱法离子交换色谱法分子排阻色谱法化学键合相色谱法亲合色谱法离子色谱法第4页，共37页，星期日，2025年，2月5日一、化学键合相色谱法化学键合相（chemicallybondedphase）将固定液（含不同官能团的有机分子）利用化学反应键合到载体表面上，使其形成均一、牢固的单分子薄层而构成的固定相1．键合相类型载体-----硅胶类型非极性固定相(ODS）极性键合相（键合-NH2、-CN、醇基等极性基团）离子型键合相（键合可交换阴或阳离子基团)键合反应---硅烷化反应、硅酸酯化反应第5页，共37页，星期日，2025年，2月5日2．分离原理（1）正相键合相色谱法特征----固定相极性＞流动相极性分离机制---类似液-液分配色谱的分离原理应用范围---适于分离溶于有机溶剂的极性至中等极性的分子型化合物(如脂溶性维生素、脂、芳香醇、芳香胺等）（2）反相键合相色谱法特征----固定相极性＜流动相极性分离机制---“疏溶剂作用”理论应用范围-----适用于分离非极性至中等极性的分子型化合物流动相-----有机溶剂流动相-----水+有机调节剂第6页，共37页，星期日，2025年，2月5日疏溶剂作用理论利用非极性溶质分子或溶质分子中非极性基团和极性溶剂接触时产生排斥力，而从溶剂中被“挤出”，即产生疏溶剂作用，促使溶质分子与键合相表面的非极性的烷基发生疏水缔合，而使溶质分子保留在固定相中.想一想影响溶质保留（时间长短）的因素有哪些?第7页，共37页，星期日，2025年，2月5日（1）溶质分子中非极性部分的总表面积溶质和固定相接触的总表面积愈大，保留值愈大，所以溶质的极性愈弱，疏水性越强，保留值越大。（2）键合相上的烷基总面积烷基键合固定相的作用在于提供非极性的作用表面。随着碳链的加长，烷基的疏水特性增强，溶质的保留值也随烷基碳链长度的增加而增大。影响溶质保留（时间长短）的四大主要因素时间，min固定相：C1固定相：C8固定相：C181-尿嘧啶；2-苯酚；3-乙酰苯；4-硝基苯；5-苯甲酸甲酯；6-甲苯第8页，共37页，星期日，2025年，2月5日（3）流动相的表面张力流动相的表面张力愈大，介电常数愈大，极性亦愈强；溶质和烷基键合相的缔合作用愈强，流动相的洗脱强度弱，导致溶质的保留值大。（4）流动相的酸碱性和盐浓度酸性抑制弱酸解离，增加保留时间；碱性抑制弱碱解离，增加保留时间；盐浓度增加不利于离子化溶质保留。第9页，共37页，星期日，2025年，2月5日二、离子色谱法1.离子色谱法（IC）离子交换色谱与电导检测器相结合分析各种离子的方法2．分离原理[抑制型（双柱型)]分离柱交换反应：R+-OH-+NaX→R+-X-+NaOH