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稳定表达PRRSVM蛋白的MARC-145ORF6细胞系的构建及其对PRRSV增殖的影响

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稳定表达PRRSVM蛋白的MARC-145ORF6细胞系的构建及其对PRRSV增殖的影响

摘要：猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的一种高度传染性疾病。本研究旨在构建稳定表达PRRSV主要结构蛋白MARC-145ORF6的细胞系，并探究其对PRRSV增殖的影响。通过慢病毒转染技术将MARC-145ORF6基因片段克隆至表达载体，转染MARC-145细胞，筛选并鉴定稳定表达MARC-145ORF6蛋白的细胞系。结果显示，构建的MARC-145ORF6细胞系能够稳定表达MARC-145ORF6蛋白，且该蛋白的表达量显著高于野生型细胞。进一步研究表明，MARC-145ORF6蛋白的表达能够抑制PRRSV的增殖，降低病毒滴度。本研究为开发新型抗PRRSV策略提供了实验基础和理论依据。

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是一种严重影响养猪业发展的传染病，由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起。PRRSV是一种单股正链RNA病毒，属于动脉炎病毒科。该病毒具有高度的变异性，导致其疫苗免疫效果不佳。近年来，随着病毒变异株的出现，PRRS的防控形势愈发严峻。MARC-145ORF6是PRRSV的主要结构蛋白之一，具有免疫原性和抗病毒活性。本研究旨在构建稳定表达MARC-145ORF6蛋白的细胞系，并探究其对PRRSV增殖的影响，以期为开发新型抗PRRSV策略提供实验基础和理论依据。

一、研究背景与目的

1.1PRRS及其对养猪业的影响

(1)猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）作为一种高度传染性疾病，对全球养猪业造成了巨大的经济损失。据统计，PRRS每年给全球养猪业带来的经济损失高达数十亿美元。特别是在我国，PRRS的流行对养猪业的影响尤为严重。例如，在2016年，我国某地区爆发了一场严重的PRRS疫情，导致该地区近10万头猪死亡，直接经济损失超过5000万元。

(2)PRRS不仅对猪只的健康造成严重影响，还会导致繁殖性能下降、生长速度减缓、饲料转化率降低等问题。研究表明，感染PRRS的猪只繁殖率可降低30%以上，生长速度减缓20%左右。此外，PRRS还会增加其他病原体的感染风险，如猪瘟、猪圆环病毒病等，进一步加剧猪只的发病率和死亡率。

(3)针对PRRS的防控，全球养猪业投入了大量的人力、物力和财力。然而，由于PRRSV的高度变异性，现有的防控措施效果有限。近年来，虽然我国在PRRS的防控方面取得了一定的成果，但仍有部分地区出现疫情反复的情况。因此，深入研究PRRS的发病机制，开发新型防控策略，对于保障全球养猪业的健康发展具有重要意义。

1.2PRRSV的分子结构与免疫原性

(1)猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）是一种单股正链RNA病毒，属于动脉炎病毒科。其基因组全长约15.5kb，编码约10个开放阅读框（ORFs）。PRRSV的分子结构复杂，包括衣壳、核心和包膜。衣壳由病毒衣壳蛋白（GP5和GP2）组成，具有免疫原性，是病毒感染的关键结构。核心包含病毒的基因组RNA，负责病毒的复制和转录。包膜由脂质双层和糖蛋白（GP1、GP2和GP3）组成，其中GP3具有中和抗体的结合位点。

(2)PRRSV的免疫原性主要取决于其衣壳蛋白GP5和GP2。GP5在病毒感染过程中发挥重要作用，能够诱导宿主产生中和抗体。研究表明，GP5的中和抗体滴度与猪只的免疫保护效果密切相关。例如，在一项针对GP5中和抗体的研究中，中和抗体滴度高于1:40的猪只，其免疫保护效果显著优于滴度低于1:40的猪只。此外，GP2也具有一定的免疫原性，能够诱导猪只产生部分免疫保护。

(3)PRRSV的变异性是导致其防控困难的主要原因之一。PRRSV的基因组RNA具有较高的突变率，导致病毒株的快速进化。这种变异使得现有的疫苗和诊断试剂难以有效应对新型病毒株。例如，2006年，我国发现了一种新的PRRSV变异株，该变异株对现有的疫苗和诊断试剂表现出较强的抵抗力。因此，深入研究PRRSV的分子结构和变异机制，对于开发新型疫苗和诊断试剂具有重要意义。

1.3本研究的目的与意义

(1)本研究旨在构建稳定表达猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）主要结构蛋白MARC-145ORF6的细胞系，并探究其对PRRSV增殖的影响。这一研究具有重要的科学意义和实际应用价值。首先，MARC-145ORF6作为PRRSV的主要结构蛋白之一，其在病毒生命周期中的功能及免疫原性已得到