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miR-196b-5p介导Nras调控青光眼小梁网细胞炎症过程的作用与机制研究

摘要

目的：小梁网(trabecularmeshwork,TM)细胞的功能失调是导致眼内压增高和青光眼发生

RNAnon-codingRNAncRNA

的主要因素。研究发现，多种非编码（，）能够通过调节

TMRNAMicroRNAmiRNA

细胞功能来控制眼内压。微小（，）是一种小型、单链的非

编码RNA，参与生命过程中一系列重要进程如细胞凋亡、脂质代谢等，然而，它们在

青光眼发生过程中的生物学功能和作用机制仍不完全明确。本研究着重研究

miR-196b-5p在TM细胞中的影响。

方法：1.构建青光眼大鼠模型，眼压计对对照组和青光眼模型组的大鼠进行眼压测定，

使用高通量测序来分析正常组和青光眼模型组大鼠小梁组织中miRNA表达谱；2.采用

R语言对获得的miRNA数据进行分析，设定差异倍数（FoldChange，FC）≥2.0且P

＜0.05作为差异表达miRNA的标准，选取出在青光眼模型组差异表达最为显著的

miRNA作为研究焦点；3.GO和KEGG分析对预测的靶基因进行富集分析,识别了其在

作用过程中关键信号通路；4.采用实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）检测对照

组和青光眼模型组大鼠中差异表达显著miRNA对应的mRNA水平；5.通过免疫荧光

原位杂交实验（fluorescenceinsituhybridization，FISH）检测miR-196b-5p在小梁组织

的表达情况；6.转染小干扰RNA（si-mimicNC、si-inhibitorNC、si-miR-196bmimic、

si-miR-196binhibitor）至永生化人小梁细胞(immortalizedhumanTMcells,iHTM)和青

光眼人小梁(glaucomatoushumanTM,GTM3)细胞中，使用RT-qPCR评估转染效率并

检测对TM细胞炎症过程的影响；利用Transwell实验评估TM细胞迁移能力的变化；

通过免疫荧光检测miR-196b-5p对TM细胞骨架的影响；使用CCK-8实验检测转染

siRNATM7.miR-196b-5pagomir

后细胞存活能力的改变；玻璃体腔注射后，使用眼

RT-qPCRHE

压计测量眼压，方法检测小梁组织中炎性过程，染色检查小梁组织形态；

8.RNA-RNApulldownmiR-196b-5p9.iHTM

通过生物信息学分析和筛选下游蛋白；在

miR-196b-5pRT-qPCRmRNA

细胞中转染，检测下游分子水平表达变化。

结果：1.与对照组相比，卡波姆940前房注射后的大鼠眼压显著且稳定升高，小梁组

织形态具有显著差异，视网膜神经节细胞凋亡增加；2.在青光眼模型组（n4）和正常

组（n4）小梁组织中共预测到553个miRNA，在两组中共筛选出174个符合FC≥2.0，

P0.05标准的差异表达的miRNA，其中，86个miRNA在小梁组织中上调，88个miRNA

下调；3.GO分析和KEGG富集分析显示：差异表达的miRNA主要富集在MAPK、

mTORWnt4.miR-196b-5pGTM3

和信号通路等通路；与对照组大鼠组织