DB21T 2589-2016 东部白松种源相关序列多态性(SRAP)分子鉴定实验方法　　.docxVIP

ICS65.020.40B64

DB21

辽宁省地方标准

DB21/T2589—2016

东部白松种源相关序列多态性（SRAP）分子鉴定实验方法

TechnicalregulationsofmolecularidentificationmethodfordifferentprovenancesofPinusstrobuswithSRAP

2016-03-18发布2016-05-18实施

辽宁省质量技术监督局发布

I

DB21/T2589—2016

目次

前言 III

1适用范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4原理 1

5仪器和设备 1

6引物 2

7试剂与溶液 2

8实验程序 2

9分析和鉴定 5

附录A（规范性附录） 6

附录B（规范性附录） 7

附录C（规范性附录） 9

附录D（规范性附录） 10

附录E（资料性附录） 11

参考文献 12

II

DB21/T2589—2016

前言

本标准依据GB/T1.1-2009的规则起草。

本标准的附录A、附录B、附录C和附录D为规范性附录，附录E为资料性附录。

本标准由辽宁省林业厅提出并归口。

本标准起草单位：辽宁省林业科学研究院。

本标准主要起草人：陈罡，冯健，王骞春，魏忠平，叶景丰，马冬菁，白丽萍，刘平，刘怡菲，孟凡金，田永霞，张素清，陈阿梅，谭桂清，王丹，房春果，杨长明，李国军，丁彪，李玉铎，佟帅，王显军，侯燕倢，高英旭。

本标准首次发布。

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DB21/T2589—2016

东部白松种源相关序列多态性（SRAP）分子鉴定实验方法

1适用范围

本标准规定了东部白松种源分子鉴定的实验方法。

本标准适用于利用相关序列多态性（SRAP）法对东部白松种源鉴定的实验过程。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T1.1-2009标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写

3术语和定义

以下术语和定义适用于本标准。

3.1相关序列多态性sequence-relatedamplifiedpolymorphism;SRAP

利用一对引物对开放阅读框（openreadingframes，ORFs）进行扩增，因个体不同以及物种的内含子、启动子与间隔序列长度不等而产生多态性。

3.2聚合酶链式反应polymerasechainreaction;PCR

在耐热DNA聚合酶作用下，于体外快速大量特异扩增待定DNA序列的方法。

3.3引物扩增多态性primeramplifiedpolymorphism

一对引物在两个或两个以上不同材料基因组DNA之间扩增，得到数目不同或长度不同的DNA片段。

4原理

通过一对SRAP引物对东部白松基因组DNA进行扩增。正向引物（F-primer）含有17个碱基，对外显子进行特异扩增；反向引物（R-primer）含有18个碱基，对内含子区域、启动子区域进行扩增。因个体不同以及物种的内含子、启动子与间隔区长度不同而产生多态性。最终通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳将这些特异的多态性片段分离开来，通过比较待测种源和对照品种源DNA指纹谱带数据的差异，来判断待测种源与对照种源是否为相同种源。

5仪器和设备

5.1PCR扩增仪。

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DB21/T2589—2016

5.2琼脂糖凝胶电泳系统。

5.3非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳系统。

5.4凝胶成像系统和照相系统。

5.5超纯水系统。

5.6低温高速冷冻离心机。

5.7超微量紫外/可见分光光度计。

5.8高压灭菌锅。

5.9液氮罐。

5.10超低温冰箱。

5.11高压电泳仪及配套电泳槽。

5.12移液器（枪）。

6引物

引物相关信息见附录A。

7试剂与溶液

7.1主要常规试剂见附录B。

7.2非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳试剂见附录C。

7.3银染试剂见附录D。

8实验程序

8.1实验材料

选用东部白松新鲜针叶为材料提取基因组DNA。选取适量样品，装入冻存管，液氮速冻，置于超低温冰箱中