DMF对OVA诱导的呼吸道过敏性炎症反应的作用及机制研究.pdf

华中科技大学硕士学位论文

摘要

背景：

哮喘是由多种免疫细胞与呼吸道上皮细胞共同参与的慢性炎症性疾病，具有高

度异质性。临床以过敏性哮喘最为常见，主要特征为呼吸道2型细胞因子IL-4、IL-5

和IL-13升高，肺组织嗜酸粒细胞浸润、杯状细胞化生和黏液过度分泌、气道高反应

性以及血清IgE水平升高。富马酸二甲酯(Dimethylfumarate，DMF)是三羧酸循环中

间物富马酸的衍生物，具有抗炎抗氧化及调节多种免疫细胞的功能，已于2013年被

FDA和欧洲药品管理局批准用于治疗自身免疫性疾病，如银屑病和多发性硬化症。

DMF在过敏性哮喘中的作用与机制尚待阐明。

目的：

研究致敏期或激发期给予DMF对OVA诱导的C57BL/6小鼠呼吸道过敏性炎症

的影响及机制。

方法：

建立OVA诱导的过敏性哮喘模型，分别在激发期或致敏期给予DMF。收集肺

组织、支气管肺泡灌洗液和血清，借助流式细胞术检测免疫细胞及其亚群的表型和

频率；H＆E和PAS染色观察气道炎性细胞浸润和杯状细胞化生；ELISA检测血清

IgE水平及支气管肺泡灌洗液中细胞因子水平。致敏期机制研究进行腹腔灌洗，流式

细胞术检测腹腔免疫细胞组成，ELISA检测腹腔灌洗液细胞因子水平；体外培养腹

腔巨噬细胞研究DMF对NLRP3炎症小体活化的作用。

结果：

1.激发期给予DMF仅抑制肺组织Mo-DC募集，不影响OVA诱导的呼吸道过

敏性炎症反应；

2.致敏期给予DMF显著抑制OVA诱导的过敏性呼吸道炎症，表现为BALF和

肺组织嗜酸粒细胞浸润减少，2型细胞因子IL-5及IL-13的水平降低，支气

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管及血管旁炎性细胞浸润降低、杯状细胞化生减少以及血清IgE和IgG1降

低；

3.致敏期给予DMF，激发后肺组织cDC2和Mo-DC的数目，效应记忆T细胞

数目、Th2细胞和ILC2的数目及功能均显著下降；

4.致敏期给予DMF降低腹腔IL-1β水平，抑制炎性单核细胞募集，并显著降

低其表面CD86和MHCII分子表达；

5.体外培养腹腔巨噬细胞，建立体外NLRP3炎症小体活化体系，发现DMF可

显著抑制OVA/Alum诱导的腹腔巨噬细胞NLPR3炎症小体活化，IL-1β分

泌减少。

结论：

1.激发期给予DMF不影响OVA诱导的过敏性呼吸道炎症；

2.致敏期给予DMF可显著抑制OVA诱导的过敏性呼吸道炎症，肺组织嗜酸粒

细胞浸润、2型细胞因子水平、杯状细胞化生以及血清IgE水平等指标均显

著降低；

3.致敏期给予DMF可通过抑制OVA/Alum诱导的腹腔巨噬细胞NLRP3炎症小

体活化，导致IL-1β释放减少，抑制炎性单核细胞的募集和抗原提呈功能，

致使T细胞针对OVA抗原的初次应答削弱，过敏性哮喘反应显著降低。

关键词：DMF；过敏性哮喘；腹腔巨噬细胞；NLRP3；IL-1β

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目录

中英文缩写对照表III

摘要VI

ABSTRACTVIII

DMF对OVA诱导的呼吸道过敏性炎症反应的作用及机制研究

1引言1

2.材料与方法3

3.实验结果18

3.1激发期给予DMF对OVA诱导的呼吸道过敏性炎症反应的影响18

3.1.1动物模型和实验分组18

3.1.2激发期给予DMF对OVA诱导的呼吸道过敏性炎症反应的影响19

3.1.3激发期给予DMF对OVA诱