红细胞酶型课件.pptVIP

紅細胞酶型第一節概述紅細胞酶型是紅細胞多態性同工酶個體間的遺傳差異。同工酶是指能催化相同的化學反應，但蛋白質分子結構不同的一類酶。紅細胞酶對底物具有高度專一催化作用，受遺傳基因所控制。它廣泛存在於人體的組織器官和體液中。1.複基因座同工酶由位於不同基因座基因編碼的同工酶。這類同工酶各亞基的一級結構差異很大。2.複等位基因同工酶由單基因座上的基因發生突變而形成的多個等位基因編碼的同工酶。各等位基因編碼的肽鍵一級結構不同，具有個體差異，成為個人識別的基礎。3.等位基因同工酶由單基因座的基因突變產生等位基因編碼的同工酶一、同工酶分類：二、紅細胞酶型的分型原理：根據酶蛋白分子的大小和所攜帶負電荷量的不同，通過電泳使之分離，並利用酶的催化活性，作用於底物，使之顯帶，根據電泳譜型進行判型。顯譜方法：①螢光染色法；②電子轉移染料染色法；③酶偶聯染色法；④化學測定染色法。第二節紅細胞酸性磷酸酶（EAP）酸性磷酸酶（acidphosphatase,ACP）是一組在酸性條件下催化磷酸單酯水解的酶類。一、生物化學特性酸性磷酸酶廣泛分佈於人體各組織中。根據分佈不同，可將人體內ACP分為3大類：紅細胞ACP（EAP）；細胞分泌的ACP組織細胞溶酶體中的ACP。二、遺傳多態性EAP由一組單基因座複等位基因所控制。基因定位於人體第2號染色體短臂2區5帶。1963年Hopkinson等用澱粉凝膠電泳法測出了5種表型，符合孟德爾遺傳規律。三、群體遺傳學調查結果在已調查的人群中，EAPb頻率均高於EAPa。EAP基因頻率的分佈有明顯的種族差異。四、EAP型的分型方法澱粉凝膠電泳、瓊脂糖凝膠電泳、醋酸纖維素膜電泳及聚丙烯醯胺凝膠等電聚焦顯譜方法：以4－甲基傘形酮磷酸鹽為底物。4－甲基傘形酮磷酸無螢光，在EAP催化下可分解為4－甲基傘形酮和磷酸，4－甲基傘形酮具有螢光性，在紫外線照射下可發出螢光。以譜帶的遷移率及譜帶的數目為依據外，還要根據譜帶的相對強度來決定型別。第三節酯酶D酯酶D（EsD）是一組能夠水解羧酸酯鍵的酶，廣泛地存在於人體組織中。酯酶A、B、C的電泳譜型在所有個體都一樣，不具多態性，只有酯酶D具有多態性。Hopkinson（1973）用澱粉凝膠電泳從紅細胞解離液中發現酯酶D的遺傳多態性。基因定位於人體第13號染色體長臂上。常用瓊脂糖凝膠電泳分型反應原理：4－甲基傘形酮醋酸鹽在EsD的催化下可分解為4－甲基傘光形酮和羧酸陰離子，4－甲基傘形酮具有螢光性，在紫外線照射下可發出螢光。第四節磷酸葡萄糖變位酶磷酸葡糖變位酶（phosphoglucomutase,PGM）是一組主要作用於糖原代謝的酶類，廣泛地存在於哺乳類動物各種組織中。磷酸葡糖變位酶能夠可逆地催化葡糖－1－磷酸和葡糖－6－磷酸的相互轉化，將儲存的糖原轉變後進入糖分解代謝，是糖代謝中起重要作用的一種酶1972年Ishimoto等將聚丙烯醯胺凝膠等電聚焦技術應用於PGM1同工酶的研究，發現PGM1亞型PGM1亞型有4個共顯性等位基因PGM1*1+、PGM1*1-、PGM1*2+、PGM1*2-。編碼10種亞型，1＋、1＋1-、1-、2＋、2＋2-、2-2＋、2＋1＋、2＋1-、2-1＋和2-1-。顯譜原理：PGM1在G－1，6－2P存在下催化G-1-P轉化成G-6-P。G-6-PD可使G-6-P氧化，同時使NADP還原為NADPH。NADPH在PMS存在下，使MTT還原為深藍色不溶性的甲月替而顯示酶譜帶。