C9orf72+poly+PR促进p53稳定机制探究.pdf

华中科技大学硕士学位论文

摘要

背景：

肌萎缩性侧索硬化（Amyotrophiclateralsclerosis,ALS）和额颞叶痴呆

（Frontotemporaldementia,FTD）是两种典型的神经退行性疾病，其临床表现主要为

精神异常、行动能力受阻、失语等。C9orf72第一个内含子中的GGGGCC重复突变

被认为是两种疾病的共同致病因子之一。目前，针对C9orf72基因影响两种疾病的进

程主要有三种假说：1.C9orf72基因自身功能缺失；2.C9orf72基因突变产生的RNA

簇的毒性作用；3.C9orf72基因突变产生的五种二肽重复蛋白（DPR）的毒性作用。

必威体育精装版研究表明，C9orf72突变产生的脯氨酸-精氨酸重复序列蛋白（C9orf72polyPR或

C9orf72PR）对神经元的毒性作用主要是通过促进p53对PUMA的转录进行调控，

且C9orf72PR蛋白能促进p53的稳定性，但具体机制尚不明确。

目的：探究C9orf72突变产生的PR蛋白促进p53稳定进而促进神经元损伤的机

制。

方法：利用慢病毒和质粒表达系统在原代神经元及多种模式细胞中过表达

C9orf72PR蛋白，并通过实时荧光定量PCR，免疫荧光，免疫印迹，LDH，PI染色，

GSE数据库数据分析等方法阐明C9orf72PR蛋白促进p53稳定性的具体机制。

结果：

1.C9orf72PR促进p53蛋白水平升高及神经元的凋亡。

2.C9orf72PR通过下调蛋白酶体活性减少p53的降解，增加p53的蛋白水平。

3.C9orf72PR通过影响p53与mdm2核浆分布，引起p53与mdm2的结合障

碍，减少p53的降解。

4.C9orf72PR竞争性干扰mdm2与p53的结合，抑制p53的降解。

结论：C9orf72PR通过干扰蛋白酶体活性和p53-mdm2结合作用增强p53的稳

定性及其下游调控因子转录活性从而诱发神经退变。

关键词：C9orf72PR；p53；mdm2泛素-蛋白酶体途径

V

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Abstract*

Background:

Amyotrophiclateralsclerosis(ALS)andfrontotemporaldementia(FTD)aretwo

typicalneurodegenerativediseaseswhichclinicalmanifestationsarementalabnormalities,

impairedmobility,andaphasia.TheGGGGCCrepeatmutationinthefirstintronofC9orf72

isconsideredtobeoneofthecommonpathogenicfactorsofthesetwodiseases.Currently,

therearethreemainhypothesesfortheimpactsoftheC9orf72geneonALS/FTD:1.Loss

offunctionoftheC9orf72geneitself.2.ToxicityoftheRNAclusterproducedbythe

mutationoftheC9orf72gene.3.Toxicityofthefivedipeptiderepeatproteins(DPRs)

producedbythemutationoftheC9orf72gene.Recentstudieshavesuggestedthatthetoxic

effectsofproline-argini