电针通过ANXA1促进Reelin蛋白表达和分泌改善脑缺血再灌注损伤的研究.pdf

华中科技大学硕士学位论文

摘要*

目的：电针治疗能有效改善脑缺血引起的神经功能损伤，促进缺血性脑卒中患

者康复，但电针治疗的作用机制仍在探索中。课题组前期研究发现，电针上调脑缺

血后ANXA1蛋白表达；也能上调脑缺血后Reelin蛋白表达，Reelin蛋白对神经功能

损伤具有改善作用。课题组前期研究还发现，ANXA1作用的下游靶分子较多，而不

同的靶分子能产生不同的效应，我们期望证实Reelin蛋白是ANXA1的靶分子之一。

本研究将以电针引起ANXA1和Reelin蛋白表达变化为切入点，通过研究ANXA1

和Reelin蛋白之间的关系，探讨电针上调ANXA1改善脑缺血损伤的下游机制。

方法：（1）构建小鼠大脑中动脉栓塞-再灌注模型；（2）电针穴位小鼠人中、承

浆穴；（3）Ad-shANXA1干扰ANXA1基因表达；（4）WB技术和IF技术检测ANXA1

及Reelin蛋白表达；（5）RT-PCR技术检测ANXA1及ReelinmRNA表达；（6）ELISA

检测Reelin蛋白分泌；（7）TUNEL染色检测细胞凋亡；（8）小鼠转棒仪检测小鼠运

动协调能力；Berdson评分判断小鼠神经功能损伤；（9）Y迷宫和新物体识别实验检

测小鼠认知能力。

结果：（1）MCAO/R引起ANXA1及Reelin蛋白表达短期增加；电针介入延长

MCAO/R后ANXA1及Reelin蛋白的表达时程；shRNA干扰ANXA1表达能抑制电

针对Reelin表达的作用；提示电针通过ANXA1上调Reelin表达。（2）电针通过ANXA1

改善MCAO/R引起的神经元丢失、运动认知功能损伤，shRNA干扰ANXA1的表达

后，电针治疗作用被翻转。（3）OGD/R引起神经元ANXA1及Reelin蛋白表达增加，

Reelin蛋白在细胞膜上分布增加；ANXA1促进Reelin表达和分泌增多。

结论：电针通过上调ANXA1蛋白表达促进Reelin表达和分泌改善缺血再灌注

损伤，包括减少缺血再灌注损伤诱导的神经元凋亡，改善神经功能、运动和认知能

力损伤。

关键词：ANXA1；Reelin；电针；脑缺血再灌注；神经元

*本文的研究工作得到国家自然科学基金面上项目的资助（No.）.

V

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目录

中英文缩写对照表II

创新点概述IV

摘要V

ABSTRACTVI

1前言1

2材料与方法3

3结果25

3.1电针通过ANXA1上调MCAO/R小鼠脑皮质REELIN表达25

3.2干扰ANXA1表达抑制电针对MCAO/R的治疗作用32

3.3ANXA1促进REELIN表达和分泌40

4讨论46

5总结与展望49

6参考文献51

综述：ANXA1分泌相关研究进展57

附录1答辩委员会组成及答辩决议70

附录2统计数据71

致谢73

I

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中英文缩写对照表

ANXA1AnnexinA1(膜联蛋白A1)

APAmmoniumpersulfate(过硫酸铵)

BCABicinchoninicacid(二辛可宁酸)

BSABovineserumalbumin(牛血清蛋白)

DAPI4,6-diamidino-2-phenylindole(4,6-二脒基-2-苯基吲哚)

DMEMDulbeccosmodifiedeaglemed