T CAOE T CAOE74—2024 海洋贝类片形科吸虫PCR检测方法.pdfVIP

ICS65.020.30

CCSB41

CAOE

中国海洋工程咨询协会团体标准

T/CAOE74—2024

海洋贝类片形科吸虫PCR检测方法

PCRmethodeforthedetectionofProsostomatatrematodeinmarinemollusk

2024-02-04发布2024-02-04实施

中国海洋工程咨询协会发布

目次

前言II

1范围1

2规范性引用文件1

3术语和定义1

4缩略语1

5试剂1

6仪器与设备2

7样品2

8检测方法和阳性结果确认3

9结果判断及表述3

10安全3

11防污染措施3

12附录4

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

本文件由鲁东大学提出。

本文件由中国海洋工程咨询协会归口。

本文件起草单位：鲁东大学、中国水产科学研究院长岛增殖实验站。

本文件主要起草人：王晓通、刘雅琼、魏磊、蔡忠强、王晓娜、房燕、李明珠。

海洋贝类片形科吸虫PCR检测方法

1范围

本文件规定了海洋贝类片形科吸虫的普通PCR检测方法，包括试剂、仪器与设备、样品、检测方

法和阳性结果确认、结果判断及表述等内容。

本文件适用于海洋贝类中寄生的片形科吸虫的检测，包括肝片吸虫（Fasciolahepatica）和大片吸虫

（F.gigantica）等。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB19489-2008实验室生物安全通用要求

SN/T1193基因分析检测实验室技术要求

SC/T7103水生动物产地检疫采样技术规范

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

4.1TAE：Tris、乙酸（Aceticacid）和EDTA组成的缓冲液

4.2ITS：内部间隔序列（Internaltranscribedspacer）

4.3EDTA：乙二胺四乙酸（Ethylenediaminetetraaceticacid）

4.4SDS：十二烷基磺酸钠（Sodiumdodecylsulfate）

4.5TE：Tris盐酸和EDTA缓冲液（EDTATris-HCl）

4.6EB：溴化乙锭（Ethidiumbromide）

4.7PCR：聚合酶链式反应（Polymerasechainreaction）

4.8Tris：三羟甲基氨基甲烷（Trishydroxymethylaminomethane）

5试剂

5.1水：符合GB/T6682中规定的一级水。

5.250×TAE电泳缓冲液：按附录A.1配制。

5.3异丙醇：分析纯。

5.4氯仿/异戊醇混合液（24:1）：分析纯。

5.5酚/氯仿/异戊醇混合液（25:24:1）：分析纯。

5.6无水乙醇：分析纯。

5.770%乙醇：按附录A.2配制。

5.8检测引物ITS-F（10μmol/L）：5’-TGTCCGAGGGTCGGCTTATAAAC-3’，-20℃保存。

5.9检测引物ITS-R（10μmol/L）：5’-CACGAGGGTGCCGTCGTTATAT-3’，-20℃保存。扩增片形科

吸虫中380bp片段。