蛋白质化合物.ppt

结构域弹性蛋白酶内的2个结构域彼此非常相似返回第94页，共139页，星期日，2025年，2月5日蛋白质的三级结构蛋白质的三级结构指多肽链中所有氨基酸残基的空间关系，其具有二级结构或结构域。第95页，共139页，星期日，2025年，2月5日球状蛋白质分子的三级结构一条多肽链通过部分的α螺旋、β折叠、β转角、无规卷曲而形成紧密的球状构象。大多数非极性侧链（疏水基团）总是埋藏在分子内部，形成疏水核大多数极性侧链（亲水基团），总是暴露在分子表面，形成一些亲水区。为什么有些极性氨基酸可以存在于球形蛋白质的内部？如Ser,Arg等。第96页，共139页，星期日，2025年，2月5日球型蛋白质的活性中心例：肌红蛋白的三级结构返回在球状蛋白质表面，往往有一内陷的疏水的空穴（裂隙、凹槽），能够容纳一或二个小分子配件或大分子配体的一部分，它常常是蛋白质活性中心。维系这种特定结构的力主要有氢键、疏水键、离子键和范德华力等。尤其是疏水键，在蛋白质三级结构中起着重要作用。第97页，共139页，星期日，2025年，2月5日蛋白质的四级结构蛋白质的四级结构是由两条或两条以上各自独立具有三级结构的多肽链（亚基）通过次级键相互缔合而成的蛋白质结构。返回第98页，共139页，星期日，2025年，2月5日羧肽酶法根据氨基酸释放的动力学曲线，可确定该肽链的C端氨基酸顺序。主要方法返回第62页，共139页，星期日，2025年，2月5日蛋白质中肽链的拆离肽链间的结合非共价键连接的多肽链通过二硫键连接的多肽链温和条件下可以解离需要较强的条件将二硫键切断还原法氧化法血红蛋白(四聚体)烯醇化酶(二聚体)胰岛素免疫球蛋白等第63页，共139页，星期日，2025年，2月5日还原法将二硫键还原成巯基蛋白质中肽链的拆离第64页，共139页，星期日，2025年，2月5日还原法为防止巯基重新氧化，可用碘乙酸、碘乙酰胺等使其烷化蛋白质中肽链的拆离第65页，共139页，星期日，2025年，2月5日蛋白质中肽链的拆离氧化法二硫键用过甲酸氧化为磺酸基而拆开返回第66页，共139页，星期日，2025年，2月5日肽链的部分降解及肽片断的分离化学裂解法酶水解法溴化氰法羟胺法第67页，共139页，星期日，2025年，2月5日肽链的部分降解及肽片断的分离溴化氰法溴化氰对甲硫氨酸羧基形成的肽键特异第68页，共139页，星期日，2025年，2月5日肽链的部分降解及肽片断的分离羟胺法羟胺能专一地裂解Asn-Gly的肽键，酸性条件下裂解Asn-Pro肽键。第69页，共139页，星期日，2025年，2月5日肽链的部分降解及肽片断的分离酶水解法常用的酶：胰蛋白酶胰凝乳蛋白酶胃蛋白酶嗜热菌蛋白酶等优越性：专一性较高水解效率较高返回第70页，共139页，星期日，2025年，2月5日肽段氨基酸顺序测定及肽段重叠Edman降解法DNS-Edman方法DABITC/PITC双耦合法成功用于微量序列分析顺序分析最主要的方法使测定灵敏度，进一步提高返回第71页，共139页，星期日，2025年，2月5日二硫键与酰胺基的定位二硫键的定位将含二硫键的肽段进行酶解，分离出含二硫键的肽，对该肽进行氧化或还原，切断二硫键，生成二个小肽段，将这两个小肽段与原肽链氨基酸顺序进行比较，即可确定二硫键位置。酰胺基位置的确定用酸处理含酰胺基的肽链，使其产生游离的NH3和-COOH。测出NH3的数量和可能形成的-COOH的数量(不包括C端)，如两者相等，就可以确定酰胺基的位置。返回第72页，共139页，星期日，2025年，2月5日蛋白质的二级结构是指蛋白质分子中多肽链骨架的折叠方式，包括α螺旋、β折叠和β转角等。多肽主链的基本结构二级结构的基本构象返回超二级结构结构域第73页，共139页，星期日，2025年，2月5日多肽主链的基本结构X射线衍射法肽链的键长和键角图肽链中的二面角φ和ψ二面角决定肽链的构象返回第74页，共139页，星期日，2025年，2月5日X射线衍射法天然的蛋白质分子并不是一条走向随机的松散肽链，每一种都具有自己特定的空间结构。线性的多肽链在空间中折叠成特定的三维结构，这种空间结构通常称为蛋白质的高级结构或分子构象。肽键不能自由转动，具有部分双键性质。酰胺平面，也叫肽平面，多为反式。返回第75页，共139页，星期日，2025年，2月5日肽链的键长和键角图X射线衍射法可以测定蛋白质化学结构的键长