《狂犬病病毒微滴式数字RT-PCR方法标准》征求意见稿.pdf

ICS11.220

B41

团体标准

MA

T/CVMAXXXXX—XXXX

狂犬病病毒微滴式数字RT-PCR检测方法

MethodofdropletdigitalPCRfordetectionofrabiesvirus

（征求意见稿）

XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施

中国兽医协会发布

XX/TXXXXX—XXXX

狂犬病病毒微滴式数字RT-PCR检测方法

1范围

本文件规定了狂犬病病毒（

rabiesvirus,RV）微滴式数字RT-PCR检测的操作方法。

本件

文适用于狂犬病病毒核酸的检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB19489实验室生物安全通用要求

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

和义

3术语定

本文件有需

没要界定的术语和定义。

4缩略语

下列缩略语适用文

于本件。

数字PCR：数字聚合酶链反应（digitalpolymerasechainreaction）

r-1

blakholequenche）

BHQ1：无荧光淬灭基团（c

FAM：6-羧基荧光素（6-carboxyfluorescein）

RNA：核糖核酸（ribonucleicacid）

5原理

利用一份反应体系分成

P术原理是微化技术将

CR）的技滴

CitalRddPC

式数字PR（ropletDig，

微滴D

数万个纳升级的微滴进行定量PCR检测，本质上是将传统定量PCR的一次检测变成数万次检测，提高了

检测的灵敏度和精准度。微滴发生器可以将每一份扩增体系分成数万个均匀的纳升级微滴，每个微滴不

含或者含有一个至数个待检核酸靶分子。每个微滴都将作为一个独立的PCR扩增体系，在PCR扩增仪上

进行终点PCR扩增。利用微滴分析仪逐个对每个微滴进行检测，有荧光信号的微滴判读为1，没有荧光

信号的微滴判读为0。然后根据泊松分布原理以及阳性微滴的比例，计算出待检靶分子的浓度或拷贝数。

本文件通过特异性引物和探针进行数字RT-PCR扩增，从而对狂犬病病毒核酸进行检测。

2

XX/TXXXXX—XXXX

6试剂与耗材

6.1引物和探针

上游引物F1-1：5’-ACGCTTAACAACCAGATCAAAGAA-3’

上游引物F1-2：5’-ACGCTTAAC