《常见电泳缺陷》课件 .pptVIP

**********电泳的基本原理原理电泳利用电场使带电荷的分子按其迁移率进行分离。迁移率取决于分子的大小、形状和电荷。影响因素电泳结果受电场强度、缓冲液pH值、温度、样品浓度等因素的影响。电泳的应用领域生物化学蛋白质分析、DNA分离、RNA分析等。临床诊断血液分析、尿液分析、基因检测等。食品安全食品添加剂检测、病原微生物检测等。环境监测水质分析、土壤分析、大气污染物检测等。常见电泳缺陷概述峰型失真峰型不正常，例如峰形不对称、峰宽过大等。色带变形色带形状不规则，例如色带断裂、色带弯曲等。色带拖尾色带末端出现拖尾现象，影响分离效果。条带断裂色带出现断裂现象，影响分离效果。缺陷一:峰型失真常见现象峰形不对称、峰宽过大、峰高降低等。影响因素样品加载量过大、电场强度过高、缓冲液pH值不合适等。产生原因分析样品加载量过大样品加载量过大，会使样品在电泳过程中发生扩散，导致峰型失真。电场强度过高电场强度过高，会使分子迁移速度过快，导致峰型失真。缓冲液pH值不合适缓冲液pH值不合适，会影响样品电荷，导致迁移率改变，进而影响峰型。解决方案1减少样品加载量适当减少样品加载量，避免样品过载导致峰型失真。2降低电场强度降低电场强度，减缓分子迁移速度，提高分离效果。3调整缓冲液pH值调整缓冲液pH值，使样品处于最佳电泳状态，避免电荷变化导致峰型失真。缺陷二:色带变形常见现象色带形状不规则，例如色带断裂、色带弯曲等。影响因素样品制备不当、电泳槽温度不均匀、凝胶质量不佳等。产生原因分析样品制备不当样品制备不当，例如样品中含有杂质、样品溶解不充分等，会导致色带变形。电泳槽温度不均匀电泳槽温度不均匀，会影响样品迁移速度，导致色带变形。凝胶质量不佳凝胶质量不佳，例如凝胶孔径不均匀、凝胶浓度不合适等，会导致色带变形。解决方案优化样品制备优化样品制备方法，确保样品纯度和溶解度，减少色带变形。控制电泳槽温度保持电泳槽温度均匀，避免温度差异影响样品迁移，减少色带变形。选择优质凝胶选择孔径均匀、浓度合适的凝胶，确保凝胶质量，减少色带变形。缺陷三:色带拖尾常见现象色带末端出现拖尾现象，影响分离效果。影响因素样品浓度过高、缓冲液浓度过低、电泳时间过长等。产生原因分析样品浓度过高样品浓度过高，会使样品在电泳过程中发生扩散，导致色带拖尾。缓冲液浓度过低缓冲液浓度过低，会使样品电荷减少，导致迁移率降低，进而导致色带拖尾。电泳时间过长电泳时间过长，会使样品在电泳过程中发生扩散，导致色带拖尾。解决方案1降低样品浓度适当降低样品浓度，避免样品过载导致色带拖尾。2提高缓冲液浓度提高缓冲液浓度，增加样品电荷，提高迁移率，减少色带拖尾。3缩短电泳时间缩短电泳时间，减少样品扩散，避免色带拖尾。缺陷四:条带断裂常见现象色带出现断裂现象，影响分离效果。影响因素样品制备不当、凝胶质量不佳、电泳电压不稳定等。产生原因分析样品制备不当样品制备不当，例如样品中含有沉淀物、样品未充分溶解等，会导致条带断裂。凝胶质量不佳凝胶质量不佳，例如凝胶孔径不均匀、凝胶浓度不合适等，会导致条带断裂。电泳电压不稳定电泳电压不稳定，会影响样品迁移速度，导致条带断裂。解决方案优化样品制备优化样品制备方法，确保样品纯度和溶解度，减少条带断裂。选择优质凝胶选择孔径均匀、浓度合适的凝胶，确保凝胶质量，减少条带断裂。稳定电泳电压使用稳定的电源，保证电泳电压稳定，减少条带断裂。缺陷五:背景杂带常见现象电泳背景出现杂带，影响目标条带的观察。影响因素试剂污染、电泳槽清洁不彻底、凝胶质量不佳等。产生原因分析试剂污染试剂污染，例如缓冲液、样品溶液等，会导致背景杂带的出现。电泳槽清洁不彻底电泳槽清洁不彻底，会残留污染物，导致背景杂带的出现。凝胶质量不佳凝胶质量不佳，例如凝胶中有杂质、凝胶配制不均匀等，会导致背景杂带的出现。解决方案1使用高质量试剂使用高质量试剂，避免试剂污染导致背景杂带的出现。2彻底清洁电泳槽彻底清洁电泳槽，避免残留污染物导致背景杂带的出现。3选择优质凝胶选择质量良好的凝胶，避免凝胶质量问题导致背景杂带的出现。缺陷六:非特异性结合常见现象样品与非目标蛋白发生非特异性结合，影响分离结果。影响因素抗体质量、样品制备方法、电泳条件等。产生原因分析抗体质量抗体质量差，会增加非特异性结合，影响分离结果。样品制备方法样品制备方法不当，会使样品中含有杂质，增加非特异性结合。电泳条件电泳条件不合适，例如电泳时间过长、电