基因工程常规技术凝胶电泳优品.ppt

基因工程常规技术凝胶电泳;电泳迁移率及其影响因素;;Relaxed;;;;;;电泳的分类;凝胶电泳

;;克隆基因的检查和鉴定方法;;琼脂糖凝胶电泳;空隙小，分辨率高：

小分子较易通过，而大分子难通过；

空隙大，分辨率低：

大小分子几乎以同等速率通过。;;4.电泳缓冲液;;;;;UVP全自动凝胶成像分析系统;OMEGA8-LOGO全自动凝胶成像分析系统;聚丙烯酰胺凝胶电泳

;;优点是比琼脂糖凝胶的分辨率高的多。;;;;凝胶电泳分离鉴定大小不等的酶解片段：

网格孔径的平均直径决定于丙烯酰胺和双功能交联剂的浓度。

Ethidiumbromide（EB）

UVP全自动凝胶成像分析系统

是一种线性多糖聚合物，从红色海藻产物琼脂中提取而来。

考马斯亮蓝染色可以达到0.

量取适量缓冲液，按所需浓度称取agarose琼脂糖，在微波炉或电炉上加热至全熔。

Increasingdegreeofsupercoiling

单位长度（每一厘米）支持物体上的电位降，它对泳动速度起着十分重要的作用。

是一种线性多糖聚合物，从红色海藻产物琼脂中提取而来。

在EB存在的情况下，线状DNA的电泳迁移率约降低15%。

EB在紫外光照射下能发出红色荧光，EB-DNA复合物的荧光产率比没有结合DNA的染料高出20-30倍，因此可显示DNA泳带在凝胶中所处的位置。;;考马斯亮蓝G250主要用于蛋白质含量测定

过硫酸铵（AP）为催化剂，以四甲基乙二胺（TEMED）为加速剂。

大小分子几乎以同等速率通过。

蛋白质中的多肽链处于伸展状态

双向电泳（twodimensionelectrophoresis，2D）是分离混合蛋白质最常用的方法。

单位长度（每一厘米）支持物体上的电位降，它对泳动速度起着十分重要的作用。

凝胶电泳分离鉴定大小不等的酶解片段：

大小分子几乎以同等速率通过。

在EB存在的情况下，线状DNA的电泳迁移率约降低15%。

可以制成非常均匀的凝胶，带电质点在凝胶的孔中泳动

UVP全自动凝胶成像分析系统

电泳液中的离子增加会使电泳迁移率降低

是一种线性多糖聚合物，从红色海藻产物琼脂中提取而来。

非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳

变性聚丙烯酰胺凝胶电泳

过硫酸铵（AP）为催化剂，以四甲基乙二胺（TEMED）为加速剂。

烷基亲油（蛋白质疏水区）;;;;;;;;;;双向电泳（twodimensionelectrophoresis，2D）是分离混合蛋白质最常用的方法。

双向电泳由两部分构成：等电聚焦和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS）。

该方法是依赖于蛋白质的等电点的不同和相对分子质量的不同而构建的。;所用仪器