转基因植物及其产品食用安全检测 抗营养素 第2部分：胰蛋白酶抑制剂的测定.pdf

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..本标准由中华人民共和国农业部提出。

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本标准由全国农业转基因生物安全管理标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：中国疾病预防控制中心营养与食品安全所、农业部科技发展中心、中国农业大学、

.,

天津市卫生防病中心。

本标准主要起草人：杨月欣、王竹、韩军花、李宁、汪其怀、黄昆仑、刘克明、刘培磊、连庆。

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NYIT1103.2-2006

转基因植物及其产品食用安全检测

抗营养素第2部分：膜蛋自酶抑制剂的测定

1范围

本标准规定了转基因植物及其产品中膜蛋白酶抑制剂的测定方法。

本标准适用于转基因大豆及其产品、转基因谷物及其产品中膜蛋白酶抑制剂的测定。其他的转基

因植物，如花生、马铃薯等也可用该方法进行测定。

2术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。

2.1

转基因植物geneticallym创ifiedplant

指利用基因工程技术改变基因组构成，用于农业生产或者农产品加工的植物。

2.2

转基因植物产晶productsderiv创fromgeneticallymodifiedplant

指转基因植物的直接加工产品和含有转基因植物的产品。

3原理

膜蛋白酶可作用于苯甲眈DL精氨酸对硝基苯胶（BAPA），释放出黄色的对硝基苯胶，该物质在

410run下有最大吸收值。转基因植物及其产品中的膜蛋白酶抑制剂可抑制这一反应，使吸光度值下

降，其下降程度与膜蛋白酶抑制剂活性成正比。用分光光度计在410run处测定吸光度值的变化，可对

膜蛋白酶抑制剂活性进行定量分析。

4试验材料

转基因植物及其产品、受体植物及其产品。如果对转基因植物产品中的膜蛋白酶抑制剂进行测定，

转基因植物产品和受体植物产品的处理条件应相同。

上述材料的水分含量和种植环境应基本一致。

5试剂

除非另有说明，仅使用分析纯试剂；水为蒸馆水。

5.1三短甲基氨基甲烧［tris(hydroxymethyl)aminomethane,Tris］。

5.20.05mol/LTris缓冲液：称取6.05gTris和2.94g氯化钙（GtCl2·2H20）溶于800mL水中，用浓

盐酸调节溶液的pH至8.2，加水定容至1Lo

5.30.01mol/L氢氧化锅溶液：称取0.4g氢氧化钩，加入800mL水溶解后，再加水定容至1Lo

5.4戍皖：己烧（1:1,v:v）。

5.51mmol/L盐酸。

5.6膜蛋白酶：大于10000BAEEµ/mgo

BAEE为Nα－苯甲酌－L－精氨酸乙；皖西旨（Nα－benzoyl七L-arginineethylesterBAEEu(BAEE单位）表

NY/T1103.2-2006

示膜蛋白酶与BAEE在25℃、pH7.6、体积3.2mL条件下反应，在253run波长下每分钟引起吸光度值

升高0.001，即为1个BAE£Uo

5.7膜蛋白酶溶液：称取lOmg膜蛋白酶，溶于200mL1mmol/L盐酸中。

5.8苯申酌－DL－精氨酸对硝基苯胶（benzoyl-DL-argininep-nitroanilide,BAPA）。

5.9BAPA底物溶液：称取40mg