高效液相色谱法 (2).ppt

整体柱(monolithiccolumn)是一种用有机或无机聚合方法在色谱柱内进行原位聚合的连续床固定相,具有制备简单、重现性好、多孔性优越、能实现快速、高效分离等优点。制备技术:硅胶整体柱，如Merck公司的ChromolithPerformanceRP-C18、SilicaROD和PrepROD；有机聚合物整体柱，如BIASeparations的CIM(ConvectiveInteractionMedai)等聚合物整体柱应用：高效液相色谱(HPLC)、毛细管电色谱(CEC)、微柱液相色谱(μ-HPLC)、固相萃取等系统上,成功地应用于生命科学、药物学、环境科学等领域的分离分析。第31页，共64页，星期日，2025年，2月5日何为无死体积柱头连接？无限直径效应（无限直径柱）？第32页，共64页，星期日，2025年，2月5日柱填料1．填料的特性1）基质材料①无机基体：硅胶、氧化铝、氧化锆和二氧化钛等②交联聚合物：聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸酯等③复合材料：无机基体复合一层聚合物2）形状：球形和不规则硅胶和硅基仍是目前最广泛应用的液相色谱柱填料。此外还有高分子多孔微球、高疏水表面的多孔碳、无机金属氧化物等。第33页，共64页，星期日，2025年，2月5日第34页，共64页，星期日，2025年，2月5日这类键会固定相具有热稳定好，不易吸水，耐有机溶剂的优点。能在70℃以下，pH2～8范围内正常工作，应用广泛.硅烷化（≡Si—O－Si－C）键合固定相制备反应如下：（最常见类型！）第35页，共64页，星期日，2025年，2月5日3）粒度及分布范围4）孔径和耐压性一般硅胶的孔径在60-125A,但大孔硅胶的孔径为300-1000A。硅胶填料的产品差异主要取决于：①微粒基质的制备过程差异；②基质和键合物反应的差异；③柱装填技术专利的差异。一些键合键新技术：（1）RX技术(Txtechnology)“碱性脱活”（2）SB技术(StabilizedBonding)“高覆盖量”（3）封端技术(End-Capping)第36页，共64页，星期日，2025年，2月5日1）为什么要封端？2）聚合物柱的特点？封端常规聚合物第37页，共64页，星期日，2025年，2月5日固定相类型(Stationaryphase)1）按色谱保留原理把填料分为：吸附剂、离子交换剂、涂敷固定液、分级孔径或交联度填料等。2）按特性分类①硅胶：极性吸附剂②键合固定相（为什么要键合？）采用硅胶表面键合技术,对硅胶微粒表面进行修饰---硅烷化,使得硅胶表面带有不同的功能团,以适应不同的分离需要。目前在色谱填料中,键合相约占78%(其中C18占反相色谱的72%),硅胶约占10%)。A.?基质：200-300m2/g的硅胶；聚合物,如聚苯乙烯和聚乙烯醇胶等。第38页，共64页，星期日，2025年，2月5日键合相类型烷基：C1、C2、C3、C4、C6、C8、C12、C16、C18、C22等反相柱；苯基：C6H5-,含有?-?相互作用；氰基：-(CH2)3-CN,带有给电子作用、羟基的氢键作用；正相、反相均可。氨基：-(CH2)3-NH2,弱阴离子型键合相,可用于糖分析。其它极性键合相还有：二醇基LichrosorbDIOL；硝基Nucleosil-NO2；二甲胺基Nucleosil-NMe2等。C.键合层（单层和聚合物）第39页，共64页，星期日，2025年，2月5日柱性能测试:应指定色谱条件和检测物质1．理论塔板高度2．峰不对称因子：应小于或等于1.23．相对保留值和分配比的重现性：精密度应优于5%和10%4．柱阻力因子：?=0.1?Pt0dp2÷(109?L2)，多孔填料500-10005.折合塔板高度第40页，共64页，星期日，2025年，2月5日流动相(Mobilephase)流动相（淋洗剂、洗脱剂）是影响液相色谱分离的一个非常重要的实验因素。改变流动相的性质和组成将改变溶质组分的保留值、分离选择性和柱效。在实际工作中，流动相的可选择范围较大是液相色谱的一个显著特点。流动相的选择和优化是大多数液相色谱分析的主要研究工作，在合理的时间内,所用的流动相要能使样品各组分达到足够的分离。1）什么溶剂适合于液相色谱？2）流动相如何影响色谱分离？问题：第41页，共64页，星期日，2025年，2月