酶与细胞的固定化技术.ppt

将酶细胞在一定温度下加热处理一段时间，使酶固定在菌体内，而制备得到固定化菌体。只适用于那些热稳定性较好的酶的固定化，热处理也可与交联法或其他固定化法联合使用，进行双重固定化。5、热处理法第30页，共70页，星期日，2025年，2月5日各种固定方法的特点比较第31页，共70页，星期日，2025年，2月5日复合载体PEI-SIO2的制备首先对硅胶进行活化处理：取5g硅胶至于30ml甲烷磺酸水溶液控制温度在102℃，搅拌活化4h，洗涤，抽滤后真空干燥24h即可；然后使硅胶发生氯丙基化，将活化后的硅胶以二甲苯为溶剂，加入少量的水，与γ-氯丙基三甲氧基硅烷在80℃反应6h，抽滤后的产物在索氏抽屉器中用甲苯抽屉24h，以除去γ-氯丙基三甲氧基硅烷，分离后产物经真空干燥，所制产物为氯丙基化的硅胶（CP-SIO2）；第32页，共70页，星期日，2025年，2月5日最后，准确称量1g氯丙基化的硅胶，至于一定浓度的聚乙烯亚胺水溶液中，于一定的温度下反应一段时间，用大量蒸馏水冲洗产物，抽滤，真空干燥后制得PEI-SIO2复合载体。第33页，共70页，星期日，2025年，2月5日第34页，共70页，星期日，2025年，2月5日第35页，共70页，星期日，2025年，2月5日称取0.5g经干燥的复合载体PEI-SIO2，加入适量的戊二醛溶液，搅拌并在室温条件下反应1h，产物用蒸馏水冲洗后抽滤，再加入30ml经磷酸盐缓冲溶液稀释过的脂肪酶液，在恒温水浴振荡器中于给出的温度下震荡一定的时间，即可制的固定化的脂肪酶。第36页，共70页，星期日，2025年，2月5日Table1IndependentvariablesandtheirlevelsforcentralcompositedesignIndependentvariablescodesVariablelevels-10+1MethanolmolarratioX1246Enzymeamount(%)X2369HexaneweightratioX30.30.60.9Temperature(℃)X4304050第37页，共70页，星期日，2025年，2月5日IndependentvariablescodesVariablelevels-2-10+1+2Enzymeamount(%)X112345Addedwater(v/v)X2246810MethanolmolarratioX323456Reactiontemperature(℃)X42535455565Reactiontime(h)X548121620第38页，共70页，星期日，2025年，2月5日RunX1X2X3X4Truemodel(%)RSMmodel(%)Error(%)1-1-10047.446.661.562-110055.7453.843.4131-10045.6847.303.554110060.8661.320.75500-1-171.9371.350.81600-1167.9367.980.077001-170.8670.470.068001172.1772.410.339-100-153.7455.583.4210-100154.3754.340.0611100-157.5859.112.6612100159.2758.910.61130-1-1066.0965.950.21140-11054.155.151.941501-1063.4563.980.7416011076.6178.322.2317-10-1046.3445.12.6818-101053.3750.714.981910-1056.4552.996.1320101055.850.938.73210-10-171.4468.683.86220-10170.1566.535.1623010-180.477.843.1824010182.0378.574.2225000089.3589.210.15260