圆锥南芥(Arabis paniculata)ApHIPP26与ApEXPA17基因的克隆及在镉胁迫.pdf

目录

目录II

摘要I

AbstrctIII

缩略词表VII

第一章文献综述1

1.1镉研究现状1

1.1.1镉污染现状及危害1

1.1.2镉污染来源2

1.2HIPP基因的结构3

1.3HIPP基因对胁迫的响应与作用4

1.3.1对生物胁迫的响应与作用4

1.3.2对非生物胁迫的响应与作用4

1.4扩展蛋白的分类及结构6

1.4.1扩展蛋白的分类6

1.4.2扩展蛋白的结构6

1.5扩展蛋白对胁迫的响应与作用7

1.5.1扩展蛋白对非生物胁迫的响应与作用7

1.5.2扩展蛋白对生物胁迫的响应与作用9

1.6圆锥南芥的研究进展9

1.7研究内容及意义10

第二章圆锥南芥ApHIPP26的克隆及功能分析12

2.1实验材料12

2.2实验试剂12

2.2.1菌株与载体12

2.2.2酶与试剂盒12

2.2.3试剂与药品12

2.2.4仪器设备13

2.3实验方法13

2.3.1圆锥南芥RNA提取及cDNA合成13

2.3.2目的基因的克隆及测序15

2.3.3生物信息学分析18

2.3.4表达模式分析18

2.3.5亚细胞定位19

2.3.6拟南芥遗传转化21

2.3.7转基因拟南芥筛选及鉴定22

2.3.8Cd24

转基因拟南芥在胁迫下的表型分析

2.3.9Cd胁迫下的根长和发芽率分析24

2.3.10Cd24

转基因拟南芥含量测定

2.3.11转基因拟南芥生理生化指标测定25

2.3.12转录组测序与分析31

2.4结果与分析31

2.4.1ApHIPP26蛋白保守基序和系统进化分析31

2.4.2ApHIPP26蛋白结构及理化性质分析32

2.4.3Cd处理下ApHIPP26基因的表达模式分析33

2.4.4ApHIPP26亚细胞定位34

2.4.5ApHIPP26基因克隆35

2.4.6转基因拟南芥阳性植株的鉴定36

2.4.7Cd胁迫下拟南芥的根长和发芽率分析38

2.4.8Cd胁迫下转基因植株的表型观察39

2.4.9ApHIPP26基因通过调节重金属转运蛋白表达增加镉积

累39

2.4.10过表达ApHIPP26增强转基因拟南芥的抗氧化能力41

2.4.11转录组数据分析44

2.5讨论46

第三章圆锥南芥ApEXPA17的克隆及功能分析50

3.1实验材料50

3.2实验试剂50

3.3实验方法50

3.3.1圆锥南芥RNA提取及cDNA合成50

3.3.2目的基因的克隆及测序50

3.3.3生物信息学分析50

3.3.4表达模式分析50

3.3.5拟南芥遗传转化50

3.3.6转基因拟南芥筛选及鉴定51

3.3.7Cd51

转基因拟南芥在胁迫下的表型分析

3.3.8Cd51