FISH技术在血液肿瘤中的应用.ppt

FISH技术在血液肿瘤中的应用

FISH-目前新兴的分子遗传学技术，原理是采用荧光标记的DNA探针，利用探针与检测样本中DNA碱基对的互补性，在探针与标本的DNA杂交后，通过荧光显微镜检测荧光信号而得出结果，从而检测细胞、组织样本中的染色体和基因异常。荧光原位杂交

FluorescenceInSituHybridization,FISH探针DNA加入荧光标记解螺旋，杂交

样本预处理探针、样本变性探针＋样本杂交杂交后洗涤结果观察FISH基本实验过程

FISH探针种类根据标记颜色的不同，常用探针主要有：单色探针（singlecolorprobe,SC）双色探针（dualcolorprobe,DC）三色探针（triplecolorprobe,TC）双色分离探针（dualcolor,breakapartprobe,DC,BCR）双色单融合探针（dualcolor,singlefusionprobe,DC,SFTrans）额外信号探针（extrasignal,ES）双色双融合探针（dualcolor,dualfusionprobe,DC,DFTrans）

单色探针（SC）：双色探针（DC）：三色探针（TC）：D7S486CEP7CEP18YX正常正常正常异常异常异常

FISH技术的应用FISH检测在临床上主要应用于：血液系统疾病：白血病、MDS、MM等；实体瘤：乳腺癌、膀胱癌等；产前遗传筛查：唐氏综合症（21三体）等临床意义：从遗传学角度检测染色体和基因的异常辅助诊断，判断预后，疗效检测及微小残留检测

FISH技术在血液肿瘤中的应用血液系统肿瘤是我国十大高发肿瘤之一。大量研究表明，不同类型的血液肿瘤往往有其特异的染色体异常，对肿瘤分型、诊断、治疗和预测用预后都具有重要意义。常规细胞遗传学分析（CC）方法只能分析中期染色体，而对间期细胞、复杂核型细胞和染色体微缺失无法进行诊断。FISH技术弥补了CC在这方面的不足，因此被广泛应用于血液肿瘤的研究、诊断等方面。白血病的细胞遗传学异常

血液肿瘤的FISH检测临床上对血液肿瘤的FISH检测主要集中在以下几个方面：染色体易位形成的融合基因检测：如CML的BCR-ABL、M3的PML-RARA、M2b的AML1-ETO融合基因等；基因缺失检测：如CLL的P53基因缺失提示患者预后很差，而13q单一缺失则提示预后较好；对异性间造血干细胞移植的植入状态检测：通过性染色体计数探针动态监测供/受者混合性嵌合体比例变化对异性间异基因造血干细胞移植后植入状态进行监测；微小残留病灶（MRD）的检测：通过对肿瘤细胞特异的染色体异常进行跟踪监测，预测疾病进展和有无复发迹象。

血液肿瘤荧光原位杂交探针

多发性骨髓瘤（MM）检测MM常涉及多种染色体异常，主要为数目异常，分为超二倍体（+3、+5、+7、+9等）和非超二倍体（-8、-13、-14、-17等）；染色体结构异常较少见，主要有1号（1p、1q，部分缺失或1q三体）、13q-、14q（多为与14q32有关的几种互补易位）等。MMFISH检测位点：P53、RB1、D13S319、IGH基因及1q21位点。推荐样本：骨髓适用人群：已确诊为MM，需评估预后、进行个体化治疗的患者

以p53探针模式图为例，17号染色体1区3带1亚带包含p53的区域标记了一段含绿色荧光的260kbDNA序列；D13S319指13号染色体上独一无二的编号319的DNA片段，标记了一段含红色荧光的220kbDNA序列。正常情况下显示2R2G信号，发生D13S319位点缺失时显示1R2G。IGH的探针在基因的两端分别标记了红色和绿色荧光，正常情况下显示红色绿色重叠信号或黄色信号，当IGH发生易位时显示为红色和绿色的分离荧光信号。P53/D13S319探针（双色探针：D13S319红/P53绿）D13S319P53正常异常IGH探针（双色分离探针）临床意义判断生存期预后较差：P53缺失（24.7个月）1q21扩增（21.9个月）IGH发生t(4;14)，t(14;16)易位（24.7个月）预后中等（42.3个月）：RB1缺失D13S319缺失预后较好（50.5个月）：IGH发生t(11；14)易位或者其他遗传改变指导临床用药（个体化治疗）：MM的初治治疗多选用化疗，包括MP方案（马法兰、泼尼松）、VAD方案（长春新碱、多柔比星、地塞米松）等；对于难治和复发的多发性骨髓瘤，多采用联合化疗和沙利度胺