细胞免疫荧光技术课件.ppt

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Ø原位检测

显示荧光

Ø抗原抗体特异反应激发光

Ø间接法

抗体荧光素标记

的抗抗体

抗原

Vinculin

Hela细胞

间接荧光抗体染色法示意图

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实验用品

试剂：材料：

固定液：4%PFAHela细胞

细胞培养皿

细胞通透：0.2%TritonX

封闭试剂：10%正常山羊血清

一抗：小鼠源抗Vinculin单克隆抗体仪器：

荧光显微镜

二抗:AlexaFluor555标记的山羊抗小鼠IgG

DAPI（4’,6-二脒基-2-苯基吲哚）

PBS洗涤缓冲液：PH7.4

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将细胞铺在将细胞培养加入4%PFA染色

24孔板中至所需密度固定10min或保存

PBS洗PBS洗

涤涤

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加入一抗加入二抗加入DAPI复染

PBSPBSPBS

洗涤洗涤洗涤

0.2%

封闭4℃过夜37℃1-2小时37℃5-10min荧光显微镜

TritonX观察

处理5min室温30min

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三，观

察

human

HeLa

cells

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Ø细胞不要铺的过密:60-70%

Ø防止细胞污染

Ø固定时间不要太长,一般10-30min

Ø

TrionX处理时间不宜过长，膜蛋白可不必处理

Ø选择合适的封闭液

Ø二抗孵育后,一定要洗干净

必要时用恒温摇床摇洗

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免疫细胞化学技术

1.免疫荧光技术

标记物

2.免疫酶技术

使抗体或抗原

抗