常用饲用酶制剂检测方法介绍.pptVIP

0102030405酶反应pH值酶活力单位定义酶反应温度底物种类和浓度酶反应时间影响酶活力的主要因素STEP01STEP02同种方法采用不同底物测定，结果相差很大。例如木聚糖酶的检测，燕麦木聚糖与桦木木聚糖的测定结果就有明显差距。A.底物种类和浓度底物浓度对酶反应速度的影响图B.酶活力单位定义国际酶学会标准单位：在特定条件下，1分钟内能转化1umol底物的酶量，称一个国际单位（IU）。酶活计算公式：酶活性(U/g)=A×D×10000.2×10×150.13×W其中: A–比色测定的木糖量，mg/ml；D–稀释倍数；1000–当量换算因数，mmol-umol；W–酶样品重量，g；150.13–木糖的分子量，mg/mmol；10–反应时间，分钟。B.酶活力单位定义木聚糖酶的活性定义A：在测定条件下，1秒钟从燕麦木聚糖中产生1nmol木糖所需的酶量。酶活计算公式：酶活（IU）=A×D×1,000,0000.2×600×150.13×W其中: A–比色测定的木糖量，mg/ml；D–稀释倍数；1,000,000–当量换算因数，mmol-nmol；W–酶样品重量，g；150.13-木糖的分子量，mg/mmol。600–反应时间，秒。几种酶制剂检测方法介绍饲料酶制剂现市场上常见的饲料酶制剂多为复合酶，其成分木聚糖酶、α-淀粉酶、（酸性或中性）蛋白酶、甘露聚糖酶、纤维素酶、β-葡聚糖酶中的几种。如何准确检测其中的一种酶制剂的活性？酶制剂检测原理酶与一般催化剂最主要的区别之一是它具有高度的专一性。04030102样品检测：酶制剂检测应用酶对底物专一性的特点，采用高纯度底物，专一检测某种酶制剂对底物的降解，然后测定产物含量（分光光度计）。标准曲线：通过用其高纯度的产物制作标准曲线，通过分光光度计的读数查出对应的产物含量，然后计算酶活。酶制剂检测原理酶制剂检测原理利用淀粉遇碘变蓝的反应，检测出未被淀粉酶分解的淀粉，运用分光光度计测定碘反应蓝值的变化，然后查表读取酶活。特点：测定а-淀粉酶的碘淀粉显色法是专一性较高、操作较简便、准确性也较高的方法。0201碘淀粉显色法A.а-淀粉酶原理：淀粉酶水解淀粉生成的麦芽糖，将3，5–二硝基水杨酸试剂还原生成3–氨基–5–硝基水杨酸的显色基团，在一定范围内其颜色的深浅与糖的浓度成正比，故可求出麦芽糖的含量。特点：专一性不高，易受其他淀粉酶（主要是β-淀粉酶）的干扰，因此，碘淀粉显色法应用较多。DNS显色法A.а-淀粉酶原理：蛋白酶水解酪蛋白，产生酪氨酸等酚基氨基酸，在碱性条件下，酚基氨基酸与Folin试剂反应生产蓝色物质，于680nm比色测定光吸收值，计算酶活力。该法的准确性及灵敏度都较高，在国内已得到公认，是应用最广的方法，我国的部颁标准及各大酶制剂生产企业都采用该法。Folin法B.蛋白酶原理：蛋白酶水解酪蛋白，产生酪氨酸等酚基氨基酸，利用酪氨酸在280nm处有特征性吸收峰,测定计算酶活。特点：紫外线操作比Folin法简便，但灵敏度仅为Folin法的1/10。紫外分光光度法B.蛋白酶现今采用的还原糖法通常是比色法，黄色的3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂与还原糖在碱性条件下共热后，自身被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。显色反应与不同聚合度同源寡糖还原性末端的含量成正比。特点：易于操作，价格低廉，方便快速，重复性好C.产还原糖酶制剂STEP2STEP1能产生还原糖的酶有：包括纤维素酶、半纤维素酶和淀粉酶等。半纤维素酶是分解半纤维素(包括各种降戊糖与聚己糖)的一类酶的总称,主要包括β-葡聚糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶和甘露聚糖酶。C.产还原糖酶制剂还原糖法01粘度法02琼脂平板扩散法03可溶性的染色底物04C.产还原糖酶制剂01还原糖法02还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。原理：酶作用于具