色谱分离法新.ppt

6.定性定量分析1）定性分析比移值定性：标准物质对照。光谱定性：薄层扫描仪各种联用检测仪器联用：将斑点吸附转移到试管中，用其他方法纯化，然后进行紫外、荧光、红外等光谱法定性。第63页，共100页，星期日，2025年，2月5日6.定性定量分析2）定量分析目视比较半定量法：杂质的限量实验。测量斑点面积：要求斑点边缘清晰从薄层上将被测组分洗脱下来进行定量测定：先确定斑点，再取下斑点和吸附剂，最后用适当的洗脱剂洗脱分析物，进行测定薄层色谱扫描仪原位定量测定：紫外－可见吸收测定或荧光测定法。第64页，共100页，星期日，2025年，2月5日7.常见问题及消除办法1）斑点拖尾现象▲酸性物质用中性溶剂展开时，造成拖尾。（在展开剂中加入一定浓度的酸）。碱性物质类似。▲在碱性氧化铝薄层上分离酸性物质，或在硅胶G板上分离生物碱，由于成盐而造成拖尾。（禁止此类操作）▲点样量过多造成拖尾（减少点样量）第65页，共100页，星期日，2025年，2月5日7.常见问题及消除办法3）边缘效应板层中部斑点的Rf值小于两侧斑点的Rf值，这是因为沸点较低的和与吸附剂亲和力弱的溶剂在薄层的两个边缘处较易挥发（用刀片刮去同样宽度的边或增加板层的预饱和时间）2）S形及波浪形斑点主要由于吸附剂的颗粒细度和板层厚度不均匀造成（铺板时要注意这个问题）第66页，共100页，星期日，2025年，2月5日7.常见问题及消除办法5）Rf值不稳定温度、分配系数、展开剂的挥发、板层厚度和不同批号的薄层板都影响Rf值。注意逐一分析。4）展速慢加入丙酮等中等极性溶剂可使不相混合的溶剂混合，加快展速。第67页，共100页，星期日，2025年，2月5日四、应用1.氨基酸分离薄层:硅胶G板;流动相:正丁醇:醋酸:水=3:1:1Rf值:丙氨酸0.27,氨基辛酸0.60,精氨酸盐酸盐0.08,磺基丙氨酸0.14,胱氨酸盐酸盐0.16,二羟基苯丙氨酸0.45,甘氨酸0.22,组氨酸盐酸盐0.06,羟脯氨酸0.20,亮氨酸0.47,甲硫氨酸0.40,颉氨酸0.36,苯丙氨酸0.49,脯氨酸0.19,肌氨酸0.17,苏氨酸0.25,色氨酸0.56第68页，共100页，星期日，2025年，2月5日2.核苷,核苷酸,寡核苷酸的分离薄层:硅胶F254流动相:正丁醇:HAc:H2O=5:2:3Rf值:腺苷-5`-磷酸0.35,胞苷-5`-磷酸0.24,脱氧腺苷-5`-磷酸三氯乙酯0.74,脱氧胸苷酰(3`,5`)脱氧胸腺嘧啶核苷0.61,5-甲基尿苷-5`-磷酸酯(胸苷-5`-磷酸)0.37,5`-0-磷酸基脱氧胸腺嘧啶核苷酰-(3`5`)脱氧胸腺苷酰-(3,5)脱氧胸苷0.19,5`-0-三氯乙基-磷酸脱氧腺苷酰(3`,5)脱氧腺苷0.68,尿苷-5`-磷酸0.30四、应用第69页，共100页，星期日，2025年，2月5日3.类固醇、固醇的分离薄层：Al2O3流动相：C6H6:乙酸乙酯=4:1Rf值:胆甾醇0.83,别色胆甾醇0.77,?-谷甾醇0.63,豆甾醇0.62,?-谷甾烷醇0.444.碱金属的分离薄层:硅胶卷流动相：含0.1mol/LI2的硝基甲烷:C6H6=40:60Rf值:Cs+0.55,Rb+0.47,K+0.36,NH4+0.24,Na+0.18,Li+0.06四、应用第70页，共100页，星期日，2025年，2月5日§5－3凝胶色谱法一、基本原理和特点二、凝胶的种类和性质三、操作技术四、应用第71页，共100页，星期日，2025年，2月5日Exercise2纸色谱法分离混合离子,若混合离子极性大小顺序为ABC,用弱极性有机溶剂展开后其Rf值大小顺序为______________________。C,B,A第31页，共100页，星期日，2025年，2月5日§5－2薄层色谱法（TLC）一、基本原理和特点二、吸附剂三、操作技术四、应用第32页，共100页，星期日，2025年，2月5日一、基本原理和特点[原理]:经典的薄层色谱是以吸附剂为固定相的一种液相色谱法，利用试样组分在流动相（展开剂）和固定相（吸附剂）之间反复吸附、