基因工程的基本操作程序完整.ppt

基因工程的基本操作程序ppt;基因工程的基本操作程序;;2）使含有目的基因的重组质粒进入受体细胞。

例：用棉铃饲喂棉铃虫，如虫吃后不出现中毒症状，说明未摄入目的基因或摄入目的基因未表达。

若不能表达，要对抗虫基因再进行修饰。

通过分子杂交的方法，可以筛选出包含有所需基因的DNA片段的细菌（或噬菌体）。

单链DNA(cDNA)

淘汰无表达产物的菌落，保留有表达产物的进一步培养、研究。

（3）直接吸收法：把目的基因和宿主细胞混在一起，让其吸收。

（4）基因枪法：在金属微粒上涂一层目的基因，然后发射到宿主细胞中。

（4）基因枪法：在金属微粒上涂一层目的基因，然后发射到宿主细胞中。

淘汰无变化的个体，保留有相应变化的个体进一步培养、研究。

淘汰无变化的个体，保留有相应变化的个体进一步培养、研究。

3）目的基因在受体细胞内，随其繁殖而复制，由于细菌繁殖的速度非常快，在很短的时间内就能获得大量的目的基因。

1）DNA序列自动测序仪：

1）将细菌用CaCl2处理，以增大细菌细胞壁的通透性。

D、基因控制的性状都能在后代表现出来

步骤三：目的基因导入受体细胞

用限制酶将供体细胞中的DNA切成许多片段，将这些片段分别载入运载体，然后通过运载体分别转入不同的受体细胞，让供体细胞提供的外源DNA的所有片段分别在各个受体细胞中大量复制（即扩增），从中找出含有目的基因的细胞，再利用一定发方法将目的基因的DNA片段分离出来。

A、能复制（）;;1.鸟枪法（散弹射击法）

用限制酶将供体细胞中的DNA切成许多片段，将这些片段分别载入运载体，然后通过运载体分别转入不同的受体细胞，让供体细胞提供的外源DNA的所有片段分别在各个受体细胞中大量复制（即扩增），从中找出含有目的基因的细胞，再利用一定发方法将目的基因的DNA片段分离出来。;1）反转录法：

以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需的基因。;;上述三种目的基因提取的方法有何优缺点？;哪些新技术能大大简化基因工程的操作技术？;3）从基???文库中获取目的基因：;用DNA重组技术将某种生物的总DNA用特定的限制性内切酶切割成一个个片段，然后将这些片段随机地连接在某些质粒或其他载体上，再将它们转移到适当的宿主细胞中，通过细胞的增殖而构成各个片段的无性繁殖系（克隆），当这些克隆多到可以包括某种生物的全部基因时，这一批克隆的总体就称为该种生物的基因文库。这一定义也适用于线粒体DNA和叶绿体DNA，分别称为某种生物的线粒体基因文库或叶绿体基因文库。为了有效地保存基因文库，可通过细菌在固体培养基上繁殖而使包含各个特定DNA片段的细菌增多。通过分子杂交的方法，可以筛选出包含有所需基因的DNA片段的细菌（或噬菌体）。经过扩增得到大量这样的细菌（或噬菌体），从中便可分离出所需基因的DNA片段。建立和使用基因文库是分离高等真核生物基因的有效手段，对于基因定位和基因工程的研究都很有用。;步骤二：基因表达载体的构建;;;①直接导入法有电击、显微注射、直接吸收、基因枪等方法。

（1）电击法：借助电击仪高压脉冲把目的基因打入宿主细胞。

（2）显微注射法：利用微量注射器在显微镜下直接把目的基因注入宿主细胞。

（3）直接吸收法：把目的基因和宿主细胞混在一起，让其吸收。

（4）基因枪法：在金属微粒上涂一层目的基因，然后发射到宿主细胞中。

②间接导入法常用的载体是质粒、λ噬菌体、科斯质粒。

（1）质粒是细菌染色体DNA以外的环状双链DNA分子，它能自我复制，也可整合到细胞染色体DNA中与其一起表达。质粒通常还含有标记基因，这可以从细胞的表型特征来识别。

（2）λ噬菌体是一种细菌病毒，其环状双链DNA可以作为目的基因的载体。

（3）科斯质粒是一种杂种质粒，含有质粒和λ噬菌体的部分顺序，很适合用作真核生物基因的载体。;1.将目的基因导入植物细胞;2.将目的基因导入动物细胞;3.将目的基因导入微生物细胞;;步骤四：目的基因的检测与鉴定;不能，受体细胞必须表现出特定的性状，才能说明目的基因完成了表达。;前三步的处理十分繁锁，为保证目的基因得到有效利用，通常用大量的受体细胞来接受不多的目的基因。这样，处理的受体细胞中真正摄入了目的基因的很少，必须将它从中检测出来。;多细胞生物的检测，将每个受体细胞单独培养并诱导发育成完整个体，检测这些个体是否摄入目的基因，摄入的基因是否表达（是否表现出相应的性状）。淘汰无变化的个体，保留有相应变化的个体进一步培养、研究。;;;;淘汰无变化的个体，保留有相应变化的个体进一步培养、研究。

获取目的基因是