多通路微滴数字PCR用于诊断疑似血流感染文献汇报.pptx

多通路微滴数字PCR用于诊断疑似血流感染的临床验证：一种有前途的诊断工具

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Part01研究背景3多通路微滴数字PCR用于诊断疑似血流感染文献汇报ppt

1、疾病背景血流感染是指各种病原微生物侵入血循环，在血液中繁殖，释放毒素及代谢产物，并诱导细胞因子释放，引起全身炎症反应综合征（SIRS)，进一步导致血压下降，感染性休克、凝血及纤溶系统的改变，最终引起全身各器官功能不全(MODS)，是一种严重的全身感染。根据病情发展，可分为：①菌血症(bacterimia）：细菌侵入血流，尚未大量繁殖，无感染临床症状，往往呈一过性；②败血症(scpticemia）：细菌在血流中大量繁殖，引发全身感染临床症状；③脓毒血症(sepsis)：临床感染症状加重，出现SIRS，由化脓菌引发者，出现全身性迁徙性感染病灶;④严重脓血症(severesepsis）：脓毒血症＋组织灌注不良或器官功能障碍（如低血压、乳酸性酸中毒、少尿、意识障碍等)；⑤脓毒性休克(septioshock)：严重脓毒血症＋充分液体复苏后仍持续低血压，或DIC；⑥顽固性脓毒性休克：脓毒症休克持续1h，经过液体复苏或血管活性药物处理无效；⑦多器官功能不全综合征(MODS)：经过感染打击，同时或相继出现≥2个器官或系统功能不全或衰竭的临床综合征。各种致病菌都可引起血流感染。常见者有金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、草绿色链球菌、肠球菌、大肠埃希菌、脑膜炎奈瑟菌、铜绿假单胞菌、变形杆菌、沙门菌属、克雷伯菌属、结核分枝杆菌、真菌等。4多通路微滴数字PCR用于诊断疑似血流感染文献汇报ppt

一、疾病背景血流感染(BSI)和相关的脓毒症、脓毒性休克是物理和免疫屏障被破坏的危重病人死亡的主要原因之一。全球微生物耐药性负担的增加和抗生素药物的不当使用使这种情况更加复杂。《2021年脓毒症和脓毒性休克管理国际指南》建议最好在诊断后1小时内立即使用抗菌药物。在耐药性细菌感染的情况下，改善BSI预后和降低死亡率的关键因素是对患者进行快速诊断并在早期给予适当的抗菌药物。5多通路微滴数字PCR用于诊断疑似血流感染文献汇报ppt

二、检测现状病原体鉴定和抗菌药物敏感性的金标准是血液培养(Bloodculture,BC)，然而，在疑似菌血症、脓毒症、脓毒性休克等患者中，该方法因灵敏度较低而受到限制。因此，当务之急是在急诊和ICU等科室开发一种能用于BSI病原体快速检测的诊断工具。与在细菌培养物上进行的分子检测不同，目前实际上已有像多重实时PCR和NGS等直接检测血液样品中病原体和耐药基因的检测方法。然而，这些技术仍然有局限性。而数字PCR是继qPCR之后的第三代PCR，它具有极高的灵敏度、精密度和重复性，且无需标准曲线即可进行绝对定量。在重症监护医学领域，ddPCR已被认为可以作为一种用于识别血液或其他临床样本中的病原体，以及评估疾病严重程度、预后、治疗指导和分析宿主对感染的反应的潜在工具。然而，在ICU临床实践中，目前仍缺乏旨在验证ddPCR对BSI的诊断性能的前瞻性研究。6多通路微滴数字PCR用于诊断疑似血流感染文献汇报ppt

三、液滴数字PCR（ddPCR）ddPCR检测由五个通道组成，周转时间为2.5h。可以识别八种最常见的细菌“ESKAPE”（屎肠球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌和大肠杆菌），以及四种真菌（近平滑念珠菌、热带念珠菌、光滑念珠菌和白色念珠菌）和三个耐药基因监测(blaKPC、blaNDM和mecA)。实验步骤：血液样本采集---核酸提取---数字PCR（液滴制备、PCR扩增、阅读扫描）--结果判读（有效性判定、阴阳性判断)--报告输出图1：领航基因ddPCR检测流程7多通路微滴数字PCR用于诊断疑似血流感染文献汇报ppt

三、液滴数字PCR（ddPCR）核酸提取后，进行数字PCR检测可为三个步骤。第一步，有限稀释，为了实现单分子模板扩增，将稀释后含有靶分子的PCR反应体系分割成大量微小的反应单元，使每个微小单元中包含零个、一个或多个靶分子。第二步，扩增反应，每个微小单元进行独立的PCR扩增。第三步