T CVMA 162—2024 非洲猪瘟病毒LAMP目视检测方法.pdfVIP

ICS11.220

CCSB41

团体标准

T/CVMA162—2024

非洲猪瘟病毒LAMP目视检测方法

Visualloop-mediatedisothermalamplificationassayfordetectionof

Africanswinefevervirus

2024-5-23发布2024-5-23实施

中国兽医协会发布

非洲猪瘟病毒LAMP目视检测方法

1范围

本文件规定了非洲猪瘟病毒LAMP目视检测方法的试剂与耗材、仪器设备、操作步骤、结果判定。

本文件适用于猪全血、血清、口鼻拭子等液体样品，脾脏、扁桃体、淋巴结、肾脏、骨髓、肌肉等

组织样品，饲料、污水、环境拭子等周边环境样品中非洲猪瘟病毒核酸的检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB19489实验室生物安全通用要求

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

ASFV：非洲猪瘟病毒（AfricanSwineFeverVirus）

DNA：脱氧核糖核酸（DeoxyriboNucleicAcid）

LAMP：环介导等温扩增技术（Loop-mediatedisothermalamplification）

PCR：聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction）

5原理

本方法是针对非洲猪瘟病毒VP72基因设计合成特异性内引物、外引物和环引物，在Bst2.0DNA

聚合酶的作用下，63℃反应55min，借助钙黄绿素的作用，肉眼观察反应液的颜色变化来判定结果，

实现目视判读试验结果。

6试剂和耗材

6.1试剂

6.1.1引物

针对非洲猪瘟病毒VP72基因设计的内引物、外引物和环引物。VP72基因核苷酸序列见附录A，

引物序列见表1。

表1引物序列表

名称序列

内引物FIP5’-AGGGGTTACAAACAGGTTATTGATGGGAGTCATTAATGAAATCTCGC-3’

内引物BIP5’-TACACAACCTTTTTGTAAAACGCGTATTGTTGGTGTGGGTCAC-3’

外引物F35’-CGCAATATACGCTTTAAACCA-3’

外引物B35’-ACATTAGTTTTTCATCGTGGTG-3’

环引物LB5’-TCGCTTTTCGCTGATACGTG-3’

6.1.2ASFVLAMP目视反应液

ASFVLAMP目视反应液的配制，见附录B.1。

6.1.3阳性及阴性对照

阳性及阴性对照的制备见附录C。

6.1.4其他试剂

6.1.4.10.01mol/L磷酸盐缓冲液的配制，见附录B.2。

6.1.4.2病毒DNA提取试剂盒、Bst2.0DNA聚合酶、荧光染料、2×反应缓冲液（RM）、DEPC处

理水采用商品化产品。

6.2耗材

6.2.1离心管：规格15mL、1.5mL，无核酸酶。

6.2.2PCR管：0.2mL，无核酸酶。

6.2.3移液器吸头：规格10μL、200μL、1000μL，无核酸酶。

7仪器设备

7.1高速台式冷冻离心机：离心速度可达12000