植物蛋白质的提取和测定实验.pdf

植物蛋白质含量的测定

一、原理

查询资料，得知玉米蛋白质含量较高。再经Tris-HCl缓冲液研磨、离心后，得可溶性蛋白

质于上清液中，将沉淀用碱水解则得到非可溶性蛋白质的提取液，将提取液与卡马斯亮蓝溶

液反应呈蓝色，在595nm处有最大吸收峰。在一定范围内，蛋白质含量与反应液在595nm

波光的吸收度呈正比，由此可求出蛋白质的含量

二、材料、仪器设备及试剂

（一）材料：玉米粒

（二）仪器设备：

分光光度计；离心机；恒温水浴；研钵；离心管；刻度移液管；微量滴定管；试管等

（三）试剂：

100μg／ml牛血清标准蛋白质溶液；0.15mol/LNaCl;1mol/LNaOH;50mmol/LTris-HCl提

取液、卡马斯亮蓝溶液

三、实验步骤

（一）标准曲线的绘制

编号012345

标准蛋白（ml)00.20.40.60.81

Tris-HCl提取液(ml)10.80.60.40.20

卡马斯亮蓝溶液(ml)555555

每管牛血清蛋白含量(ml)020406080100

加入表中的试剂，摇匀，室温放置4分钟，以不加标准蛋白的0号管为空白，在595nm波

长处测定吸光度。以标准蛋白浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

（二）样品的测定

称取鲜样0.5g，加提取液6ml，研磨成匀浆后，在10000r/min,4℃条件下离心20min，上清

液即为可溶性蛋白质提取液。沉淀加3ml1mol/LNaOH溶液，在90℃恒温水浴锅中加热20min，

在4000r/min，4℃条件下离心10min，上清液为非可溶性蛋白质提取液。取上清液各0.1ml，

分别加入Tris-HCl提取液0.9ml，然后再分别加入卡马斯亮蓝溶液5ml，摇匀，于595nm

波长处测定吸光值。根据吸光度查标准曲线，求出样品中的蛋白质含量。

四、结果计算：

样品中蛋白的含量（μg/g）＝查标准曲线值（μg）×提取液总体积（ml）/(样品鲜重（g）

×测定时加样量（ml）)

粗蛋白量（％）＝蛋白氮含量×6.2