DB22T 1997-2014 饲料中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星的测定 液相色谱-串联质谱法　　.docxVIP

ICS65.120B46

备案号：41843-2014

DB22

吉林省地方标准

DB22/T1997—2014

饲料中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星的测定液相色谱-串联质谱法

Determinationofenrofloxacin,ciprofloxacin,norfloxacininfeeds——LC-MS/MS

method

2014-02-28发布2014-04-30实施

吉林省质量技术监督局发布

DB22/T1997-2014

前言

本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2001给出的规则起草。本标准由吉林省质量技术监督局提出并归口。

本标准起草单位：吉林省产品质量监督检验院、吉林大学。

本标准主要起草人：李媛媛、刘斌、李滢倩、关树文、刘智、任明月、王颖。

工

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DB22/T1997-2014

饲料中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星的测定液相色谱-串联质谱

法

1范围

本标准规定了饲料中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星的液相色谱-串联质谱测定。

本标准适用于饲料中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星的含量测定。本标准方法检出限为10μg/kg。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T20195动物饲料试样的制备

3原理

用乙腈和磷酸盐缓冲溶液提取试样中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星，固相萃取小柱净化，5%氨水甲醇溶液洗脱，供液相色谱-串联质谱检测，外标法定量。

4试剂与材料

所有试剂，如未注明规格，均指分析纯；除另有说明外，水为GB/T6682规定的一级水。

4.1甲醇，色谱纯。

4.2乙腈，色谱纯。

4.3磷酸。

4.4甲酸，色谱纯。

4.5磷酸氢二钠(Na?HPO4.12HO)。

4.6磷酸二氢钾(KH?PO4)。

4.7氨水。

4.8磷酸盐缓冲溶液：称取5.68g磷酸氢二钠(4.5)和1.36g磷酸二氢钾(4.6)置于1000mL烧杯中，加入800mL水溶解，用磷酸(4.3)调至pH=3.0,再用水定容至1000mL。

4.9氨水甲醇溶液(5%):取5mL氨水(4.7)与95mL甲醇(4.1)混合。

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DB22/T1997-2014

4.10甲酸水溶液(pH=3.0):量取500mL水，用甲酸(4.4)调pH值到3.0。

4.11甲醇水溶液(25%):取250mL甲醇(4.1),加水稀释到1000mL。

4.12甲醇-甲酸溶液(15+85):量取30mL甲醇(4.1)与170mL甲酸溶液(4.9)混合。

4.13恩诺沙星(CAS:93106-60-6)、环丙沙星(CAS:93107-08-5)、诺氟沙星(CAS:70458-96-7)标准物质，纯度大于等于95%。

4.14标准贮备液(1.0mg/mL):称取0.1g(精确至0.1mg)标准物质(4.13),至100mL容量瓶，甲醇(4.1)定容。2℃~4℃冷藏保存，可保存6个月。

4.15混合标准工作液(1μg/mL):用甲醇水溶液(4.11)分别配成浓度范围为1ng/mL～60ng/mL标准工作溶液，现配。

4.160asisHLB固相萃取小柱或相当者：60mg,3mL。

4.17滤膜：0.22μm。

4.18氮气。

5仪器

5.1液相色谱-质谱联用仪：配有电喷雾电离源。

5.2涡旋振荡器。

5.3固相萃取装置。

5.4分析天平：感量0.1mg。

5.5粉碎机。

5.6旋转蒸发仪。

5.7氮气吹干仪。

5.8离心机。

6试样制备

选取代表性饲料样品至少500g,按照GB/T20195制备试样。

7分析步骤

7.1提取

称取试样0.5g(精确至0.1mg)于50mL具塞离心管中，准确加入6mL磷酸盐缓冲溶液(4.8),涡旋混匀，再加入10mL乙腈(4.2),于涡旋振荡器振荡提取1min,5000r/min离心5min,上清液过滤到鸡心瓶中，在残渣中加入5mL磷酸盐缓冲溶液(4.8),10mL乙腈(4.2),重复以上步骤，合并