超高效液相色谱的应用现状和发展前景.ppt

第1页，共27页，星期日，2025年，2月5日色谱分离精度高，设备简单，操作方便，根据各种原理进行分离的色谱法不仅普遍应用于物质成分的定量分析和检测，而且广泛应用于生物物质的制备分离和纯化。是目前最好的生物纯化技术。常见的分离方式蒸馏离心电泳过滤超滤色谱第2页，共27页，星期日，2025年，2月5日色谱分类4231色谱柱状色谱薄层色谱纸色谱色相色谱高效液相色谱超高效液相色谱第3页，共27页，星期日，2025年，2月5日色谱典型的仪器配置第4页，共27页，星期日，2025年，2月5日分离度色谱条件的优化速度容量开发液相色谱方法分辨率是色谱分离中主要考虑的因素在开发色谱方法时，有很多因素是很重要的。除分辨率之外，以下几个因素都要考虑。 灵敏度载样量分析速度溶剂损耗第5页，共27页，星期日，2025年，2月5日Clicktoaddtitleinhere自20世纪70年代以来，随着高效液相色谱(HighPerformanceLiquidChromatography，HPLC)技术的不断发展，美国Waters公司于2004年的匹兹堡会议上推出了必威体育精装版研制的ACQUITY超高效液相色谱(UltraPerformanceLiquidChromatography，UPLC)，其采用1．7Ixm细粒径的新型固定相，可获得高达2万块／m理论塔板数的超高柱效，并以系统整体设计的创新技术，全面提升了液相色谱的速度、灵敏度和分离度，造就了液相色谱性能上的飞跃和进步并形成分离科学的一个新兴领域。超高效液相色谱第6页，共27页，星期日，2025年，2月5日Clicktoaddtitleinhere超高效液相色谱（UPLC）的原理UPLC的理论基础为：范德米特(VanDeemeter)方程HETP=AdP+B／v+CdP2HETP：理论塔板高度A：涡流扩散系数由该方程可得出结论：颗粒度越小柱效越高；每个颗粒度尺寸有自己的最佳柱效的流速；更小的颗粒度使最高柱效点向更高流速(线速度)方向移动，而且有更宽的线速度范围所以降低颗粒度不但提高柱效，同时也提高速度。dlP：填料粒径B：分子径向扩散系数C：传质因子为流动相线速度第7页，共27页，星期日，2025年，2月5日vanDeemter曲线的提示ClicktoaddtitleinhereClicktoaddtitleinhere如果填料的颗粒继续演变……第8页，共27页，星期日，2025年，2月5日未来的色谱:更小的颗粒度液相色谱30年的发展史是颗粒技术的发展史。颗粒度的改变直接影响到柱效，从而对分离结果产品直接影响。由上图可知：随着颗粒度的不断降低，色谱分离度不断提高。小颗粒分离的理论与科学基础第9页，共27页，星期日，2025年，2月5日更小颗粒度所面临的挑战第10页，共27页，星期日，2025年，2月5日Clicktoaddtitleinhere小颗粒带来生产力基于1．7m小颗粒技术的UPLC与人们熟知的高效液相色谱(HPLC)技术，具有相同的分离原理。不同的是，UPLC不仅比HPLC具有更高的分离能力，而且结束了人们多年不得不在速度和分离度之间取舍的历史。使用UPLC可以在很宽的线速度、流速和反压下进行高效的分离工作，并获得优异的结果--------UPLC的优点超高分离度图3:UPLCTM与HPLC：分离度比较由右图可见：UPLCTM可以大大提高分离度，同时色谱峰强度也得到了提高。第11页，共27页，星期日，2025年，2月5日小颗粒带来生产力--------UPLC的优点超高速度图4:UPLC与HPLC：速度比较图5：UPLC美国药典有关物质分析实例原有HPLC分析需要4个不同的方法、三根不同的色谱柱，至少需要65分钟才能完成；UPLC使用了一根色谱柱、一种简单方法，在1分钟内即可完成。第12页，共27页，星期日，2025年，2月5日小颗粒带来生产力--------UPLC的优点超高灵敏度速度图6:HPLC到UPLCTM：灵敏度的改善无需折衷UPLCTM使用小颗粒技术可以得到更高的柱效（因而改善了分离度）、更窄的色谱峰宽，即更高的灵敏度。第13页，共27页，星期日，2025年，2月5日UPLC仪器构造第14页，共27页，星期日，2025年，2月5日UPLC仪器构造Clicktoaddtitleinhere第15页，共27页