高效液相色谱仪的原理及应用.ppt

*感谢大家观看第52页，共52页，星期日，2025年，2月5日****HPLC应用牛奶、猪肉－瘦肉精、鸡鸭蛋－苏丹红气相色谱具有以下分析特点：只能分析挥发性物质，只能分析20%的化合物；不能用于热不稳定物质的分析；用毛细管色谱可得到很高的柱效；有很灵敏的检测器如ECD和较灵敏的通用检测器（FID和TCD）；流动相为气体，无毒，易于处理；运行和操作容易；仪器制造难度较小。液相色谱与气相色谱相比较：几乎可以分析各种物质；可以用于热不稳定物质的分析；色谱柱不能很长，柱效不会很高；没有较高灵敏的通用检测器；流动相有毒，费用较高；运行和操作比GC难一些；仪器制造难度大。在实际应用中，凡是能用气相色谱法分析的试样一般不用液相色谱法，这是因为气相色谱法更快、更灵敏、更方便，并且耗费较低。气体比有机溶剂便宜。林茂：本科毕业论文，两三个月，一万多元。**手动打气。。。**流动相的作用。。。必须能溶解样品—混合洗脱剂洗脱力太小…太大…**溶解与萃取气相：硅氧烷（OV)、聚乙二醇**生物大分子、蛋白质**气相－吸附或气体溶解液相－溶解正相色谱→“正”色谱柱→“＋”柱→极性柱→极性固定相根据流动相和固定相的相对极性不同，液相色谱分为正相色谱和反相色谱。流动相极性大于固定相极性的情况，称为反相色谱。非极性键合相色谱可作反相色谱。在现代液相色谱中应用最广泛，现代液相色谱分析工作的70%以上是在非极性键合固定相上进行的。增大溶剂的极性，使组分依次洗脱下来…**内容与书不一样，以课堂为准（书上几个组成没总结，以防只看书就能考好）**气相色谱需要泵吗？输液系统的功能:◆提供足够的驱动力使流动相通过填充柱◆使流动相流量精确和稳定◆使流动相组成精确**在HPLC中应用最多的是往复泵，这种泵使用带有往复活塞小体积泵室(35～345μL)。流速不稳－保留时间定性？**气体－高压溶解－低压析出（啤酒、可乐…)**这个要注意，书上没有！**时间长、浪费溶剂**----一开始就用纯甲醇去洗，会怎么样？**IC会再讲。提问：如何增加进样量？（加大长度、内径）有的同学说加快流速、有用吗？**柱跟人一样也有幼年、青年、老年期…老化、活化…直型不锈钢管，内径1～8mm，柱长5～40cm。液－液：肥皂表面的水，。。。以前是象涂油漆一样把固定液直接涂上去，很容易流失；后来发展出化学键合的方法，固定液就象是生了根的，怎么冲都冲不掉的。**通常，化学键合相的载体主要是硅胶（表面有硅醇基）。通过化学反应把各种不同的有机基团键合到载体表面，代替机械涂渍的液体固定相。这不仅避免了液体固定相流失的困扰，还大大改善了固定相的功能，提高了分离的选择性，化学键合色谱适用于分离几乎所有类型的化合物。**100米跑，拉终点线，太高检查不到有人（有东西出来却没峰…)目前常用的检测器主要有：紫外-可见检测器荧光检测器电化学检测器折光示差检测器蒸发光散射检测器质谱检测器?紫外吸收检测器是目前HPLC中应用最广泛的检测器。它灵敏度高，线性范围宽，对流速和温度变化不敏感，可用于梯度洗脱，它要求被检测样品组分有紫外吸收，使用的洗脱液无紫外吸收或紫外吸收波长与被测组分紫外吸收波长不同，在被测组分吸收波长处没有吸收。**本质仍为紫外吸收检测器，一次一个波长一次许多个波长**荧光检测器是一种专用型检测器，灵敏度在目前常用的HPLC检测器中最高，在HPLC中应用较多。仅次于紫外吸收检测器。它用于能激发荧光的化合物。很多与生命科学有关的物质，如氨基酸、胺类、维生素、甾族化合物及某些代谢药物都可以用荧光法检测。荧光检测器在生物样品痕量分析中很有用，尤其在用荧光衍生剂后，可以检测很微量的氨基酸和肽。**m/eHPLC-紫外尚可狡辩HPLC-MS…**一定的色谱系统和操作条件下，每种物质都有一定的保留时间，如果在相同色谱条件下，未知物的保留时间与标准物质相同，则可初步认为它们为同一物质。为了提高定性分析的可靠性，还可进一步改变色谱条件（分离柱、流动相、柱温等）或在样品中添加标准物质，如果被测物的保留时间仍然与标准物质一致，则可认为它们为同一物质。跑100米，只允许你跑10秒，别人就不能跑10秒？同一个人，赛道、天气不同成绩也不同。**依据:被测物质的量W与它在色谱图上的峰面积A（或峰高）成正比。—