细菌与噬菌体的遗传重组分析.ppt

用不同的Hfr菌株进行中断杂交实验，都可做成连锁图，基因转移的顺序、转移起点和转移方向很不相同。根据上图，可以得到直线连锁图；Hfr菌株足够多，可以获得整个E.coli染色体连锁图。例子：OthithrprolacpurgalhisglythithrprolacpurOOOO第31页，共84页，星期日，2025年，2月5日小结（作图步骤）：（1）作直线连锁图，确定基因间距离及其染色体全长（分钟）。（2）画圆，根据染色体全长标示刻度，按照基因间距离标示基因。（3）标示Hfr起点、终点、菌株号。HfrAB312第32页，共84页，星期日，2025年，2月5日b.重组作图法：两基因转移时间间距小于2分钟时，中断杂交法的图距不精确，应采用传统的重组作图法。利用Hfr菌与F-菌株杂交后，在部分二倍体中，若两基因相距越近，在重组体中同时出现的机会越多；两基因相距越远，在重组体中同时出现的机会越少。根据重组体中某一性状单独出现的频率作为两基因间的交换率，就可以进行基因定位。例：紧密连锁二基因:lac-(乳糖不发酵)ade-(腺嘌呤缺陷型)第33页，共84页，星期日，2025年，2月5日Hfr：lac+ade+strsF-：lac-ade-strr在含有str无ade的基本培养基上培养选择ade+strr的重组子Hfr?F-混合培养60min再在EMB培养基上选择哪些ade+strr的重组子为lac+，哪些为lac-为何不用lac作为选择标记？第34页，共84页，星期日，2025年，2月5日=交换型重组体数交换型重组体数+未交换型重组体数?100%=lac-ade+(lac+ade+)+(lac-ade+)?100%请注意与计算真核生物重组值的区别某一性状单独出现的菌落数重组体总菌落数?100%两基因间的交换率=两个位点间的时间约为1分钟，大约相当于20%的重组值=20%第35页，共84页，星期日，2025年，2月5日lac-ade间发生交换l-a+srl+a+a-l-srsslac-ade间未发生交换l+a+a-l-srl+a+sr1、Hfr片段不能独立复制，未整合进入F-基因组中去则随细胞分裂而丢失；2、无ade的完全培养基上筛选出的菌落为lac+ade+和lac-ade+，其中前者为两基因外双交换产物，lac和ade基因并未发生重组，后者为两基因间重组产物；3、另一交换产物lac+ade-在上述培养基中不能筛选出，即便筛出也没意义，因为lac基因先于ade基因进入，而ade基因未进入而形成的交换产物，不能真实反映两基因间的交换频率；这也是为何选择ade为筛选基因的原因！4、只有在缺乏ade基因的完全培养基中筛选出的lac-ade+才是重组子；第36页，共84页，星期日，2025年，2月5日第37页，共84页，星期日，2025年，2月5日3.性导（Sexduction）概念：接合以F’因子为媒介将供体菌染色体DNA转移到受体细菌，形成部分二倍体的过程。第38页，共84页，星期日，2025年，2月5日F’菌株的突出特点：

⑴F’因子转移基因的比率极高，如同F+因子的转移比率；

⑵F’因子的自然整合率极高，但是整合不是随机的，需要

经过配对整合到特定的座位上。第39页，共84页，星期日，2025年，2月5日应用：（1）确定基因的显隐性关系（上图）。（2）绘连锁遗传图：原理：F+?不同的Hfr?不同的F’?距离近的基因容易环出到同一个F’因子上?“并发性导”?详尽的连锁图.方法：同“并发转导”第40页，共84页，星期日，2025年，2月5日性别细菌状态F因子状态♀F-无F因子♂F+F因子为游离状态♂HfrF因子整合到宿主染色体上♂F?带有部分宿主染色体的F因子，为游离状态1、细菌细胞的两种性别、四种状态：小结第41页，共84页，星期日，2025年，2月5日2、F+、F-、Hfr、F的关系转变关系F+F-丢失杂交F+Hfr整合到E.coli染色体规则脱离E.coli