《荧光定量PCR技术》课件2.ppt

荧光定量PCR技术;课程概述;第一部分：荧光定量PCR基础;PCR技术简介;传统PCR的局限性;荧光定量PCR的定义;荧光定量PCR的优势;荧光定量PCR的应用领域;第二部分：荧光定量PCR原理;荧光定量PCR的基本原理;扩增曲线解析;阈值循环数（Ct值）的概念;荧光信号检测原理;SYBRGreenI染料法;TaqMan探针法;分子信标法;其他荧光检测方法;第三部分：荧光定量PCR仪器设备;荧光定量PCR仪的结构;热循环模块;光学检测系统;数据采集和分析软件;常见荧光定量PCR仪器品牌比较;第四部分：实验设计与操作;样品制备;引物设计原则;探针设计原则（适用于TaqMan法）;反应体系的配制;PCR程序设置;阴性对照和阳性对照的设置;内参基因的选择;实验重复与质量控制;第五部分：数据分析方法;扩增效率的计算;标准曲线法;相对定量法（2-ΔΔCt法）;绝对定量法;熔解曲线分析;多重荧光定量PCR数据分析;常见分析软件介绍;第六部分：应用实例;基因表达分析;病原体检测;SNP分型;基因拷贝数变异检测;药物代谢基因多态性分析;肿瘤标志物检测;转基因生物检测;第七部分：质量控制与注意事项;实验室环境要求;试剂质量控制;仪器校准与维护;操作人员培训;常见问题及解决方案;实验结果的验证方法;生物安全注意事项;;数字PCR技术;;总结与展望