转基因动物的安全性.ppt

三、转基因动物的安全性评价1转基因动物安全性评价的内容转基因动物在自然界中的存活能力；繁殖、遗传及其他生物学特性。插入序列的遗传稳定性、表达产物、表达量及其组织器官分布。插入序列的转移能力及转移后的可能后果转基因性状和转基因操作对人健康或生态环境的危害或潜在危险。转基因动物插入序列及其表达的检测鉴定技术及其有效性。第23页，共46页，星期日，2025年，2月5日2目的基因克隆、体外重组及转基因动物制备方法转基因动物生产中目的基因克隆和体外重组：选择目的基因和载体的安全性；组装完整的表达栽体的安全性；外源基因(目的基因)扩增制备、贮藏的安全性。转基因动物的制作方法：显微注射—随机整合、插入突变；精子载体法—体外授精法卵母细胞内精子显微注射法即将正常精子进行破膜处理后，与带目的基因的表达载体共孵育，然后通过显微注射注入处于减数分裂II期的卵母细胞质中，受精后将早期胚胎转入母体子宫内发育成后代转基因动物。第24页，共46页，星期日，2025年，2月5日显微注射法第25页，共46页，星期日，2025年，2月5日体外授精法第26页，共46页，星期日，2025年，2月5日第27页，共46页，星期日，2025年，2月5日逆转录病毒载体法：逆转录病毒是一种单链RNA病毒，能直接感染宿主细胞，在细胞内病毒RNA反转录为DNA。整合到细胞基因组DNA中；病毒DNA中段可被取代，重组后的DNA同样能够整合到细胞基因组DNA中，并能被转录和包装；目的基因能以逆转录病毒为媒介转移至受体动物中，制备转基因动物。逆转录病毒载体法操作简单、效果稳定、外源基因整合率高、宿主范围广；但容量有限、难以整合进生殖系统；有可能激活某些有害基因(如原癌基因)或失活某些有用基因(如肿瘤抑制基因、细胞凋亡相关基因)。第28页，共46页，星期日，2025年，2月5日第29页，共46页，星期日，2025年，2月5日第30页，共46页，星期日，2025年，2月5日胚胎干细胞介导的基因转移胚胎干细胞是指囊胚期内细胞团中尚未分化的细胞，理论上是全能性的细胞，在一定条件下可分化为其他类型的细胞，也可发育成完整个体。将目的基因转移入胚胎干细胞，再重新导入囊胚中，可培育出转基因动物个体，但得到的多是嵌合体，有些能传代表达目的基因。体细胞基因转移和克隆以体细胞为转基因受体，导入目的基因后再进行体细胞扩增，将扩增的细胞作为供体，将其细胞核导入去核受精卵中，培养到胚细胞团后植入子宫发育为新个体表达目的基因。基因打靶法—直接将目的基因通过基因枪射入受体细胞，多拷贝进入，少数重组。第31页，共46页，星期日，2025年，2月5日第32页，共46页，星期日，2025年，2月5日第33页，共46页，星期日，2025年，2月5日第1页，共46页，星期日，2025年，2月5日第一节转基因动物概况转基因动物是指采用基因工程手段将外源基因有目的、有计划地导入受体动物的基因组中,从而改变受体动物的性状，获得新功能，并能稳定遗传的遗传改造动物体.世界上首例转基因动物是1982年问世的转大鼠生长素基因小鼠(Palmiter).动物转基因技术是人类基于现代分子生物学、动物胚胎学和生物工程学而有目的、有计划、有预见地改变动物遗传组成的一项综合性技术体系.第2页，共46页，星期日，2025年，2月5日一、转基因动物的研究现状1国外转基因动物研究转基因动物育种研究：1982年Palmiter等将大鼠生长激素(GH)基因导入小鼠受精卵中获得转基因“超级鼠”；世界各国都相继在兔、羊、猪、牛、狗、鸡、鱼等动物获得转基因成功。1988年从鸡DNA文库中克隆了一个刺激肌肉发育的基因SKI导人小鼠受精卵,获得转基因小鼠的体脂减少明显,但同时出现骨胳肌肥大症。Pursel(1993)将感染绵羊visna病毒LRT与该病毒外壳蛋白编码序列相连,直接用微注射法导人绵羊受精卵,获得3头转基因羊。第3页，共46页，星期日，2025年，2月5日第4页，共46页，星期日，2025年，2月5日第5页，共46页，星期日，2025年，2月5日第6页，共46页，星期日，2025年，2月5日第7页，共46页，星期日，2025年，2月5日转基因动物作为生物反应器的研究：Gorden等人1987年在转基因小鼠乳腺中表达了人的tPA基因；1991年英国人Wright将绵羊BLG基因调控区与抗胰蛋白酶基因相连,经微注射