T CVMA 219—2025 犬细小病毒时间分辨荧光免疫层析检测方法.pdfVIP

ICS11.220

CCSB41

团体标准

T/CVMA219—2025

犬细小病毒时间分辨荧光免疫层析

检测方法

TRFIAfordetectionofcanineparvovirus

2025-2-14发布2025-2-14实施

中国兽医协会发布

犬细小病毒时间分辨荧光免疫层析检测方法

1范围

本文件规定了犬细小病毒时间分辨荧光免疫层析检测方法的试剂与耗材、技术原理、操作步骤、

结果计算、试验成立条件及结果判定等内容。

本文件适用于检测犬粪便中的CPV抗原，可用于CPV的免疫筛查、辅助诊断等。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

时间分辨荧光免疫层析技术Timeresolvedfluorescenceimmunochromatographicassay；TRFIA

是利用时间分辨荧光微球作为示踪物，将其标记到抗体（或抗原）上，在固相层析材料构建的体

系中发生特异性免疫反应后形成复合物，通过测定荧光信号强度从而实现待测物快速定量的分析技

术。

3.2

犬细小病毒Canineparvovirus；CPV

是细小病毒科（Parvoviridae）、细小病毒亚科（Parvovirinae）、原型细小病毒属（Protoparvovirus）、

食肉动物细小病毒1（CarnivoreProtoparvovirus1）的成员，是一种单链脱氧核苷酸病毒，临床上可引

起出血性肠炎和急性心肌炎等。

4技术原理

采用双抗体夹心法的原理，检测犬粪便样本中的CPV抗原。当粪便样本中CPV抗原与荧光纳米微球

标记的CPV抗体反应后形成免疫复合物，继续与硝酸纤维素膜上检测线包被的CPV抗体形成双抗体夹心

免疫结合物，其余物质继续向前层析，荧光微球标记物与质控线上的抗体结合形成免疫复合物，最后用

荧光分析仪读取检测卡上的荧光信号。

5仪器、材料与试剂

5.1仪器

5.1.1便携式荧光分析仪：适用于检测波长为365nm/610nm的荧光信号强度。

5.1.2单道微量移液器（0.5µL~10µL；10µL~100µL；20µL~200µL）。

5.1.32℃~8℃冰箱、﹣20℃冰箱。

5.2材料

5.2.1CPV阳性粪便、CPV阴性粪便、采样用拭子。

5.2.2CPV时间分辨荧光免疫层析检测卡，其制备见附录A。

5.3试剂

5.3.1水按照GB/T6682中的要求，二级。

5.3.2样品稀释液、封闭液、样品垫处理液及相关试剂，按照附录B的要求配制。

6实验前准备

6.1样品的采集

按照NY/T541中的规定进行样品的采集与处理，并做好个人防护。握住肛拭子手柄端，将肛拭子

插入犬肛门的1~2cm处擦拭或在肛门内轻轻旋转3~5圈后取出。

6.2样品的贮存

样品在2℃~8℃冷藏，可保存24h。若需长时间保存，应将样品置-20℃以下保存。按照GB19489

的规定做好生物安全工作。

7操作步骤

7.1样品处理

将采集样本的肛拭子放入含有至少500μL样本稀释液的管中，充分搅拌混匀后静置1min，上

清液即为检测液。

7.2加样及孵育

从原包装铝箔袋中取出CPV时间分辨荧光免疫层析检测卡，置于平坦干净的台面上，用移液器吸取