DB22T 3038-2019 食用犬疫病实验室检测技术规程　.docxVIP

ICS65.020.30B41

DB22

吉林省地方标准DB22/T3038—2019

食用犬疫病实验室检测技术规程

Laboratorytestingtechnicalregulationsofediblecanineepidemicdisease

2019-05-27发布2019-06-17实施

吉林省市场监督管理厅发布

I

DB22/T3038—2019

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由吉林省畜牧业管理局提出并归口。

本标准起草单位：延边大学。

本标准主要起草人：金鑫、李香春、张皓、李成辉、陈竞、于建华、陆秀娟。

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DB22/T3038—2019

食用犬疫病实验室检测技术规程

1范围

本标准规定了食用犬主要疫病实验室检测技术的术语和定义、检测、废弃物处理和档案管理。本标准适用于食用犬疫病实验室检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/TGB/TGB/TGB/T

18646-2018

27532-2011

27533-2011

36789-2018

动物布鲁氏菌病诊断技术犬瘟热诊断技术

犬细小病毒诊断技术

动物狂犬病病毒核酸检测方法

NY/T1948兽医实验室生物安全要求通则

NY/T2961兽医实验室质量和技术要求

SN/T4749-2017犬传染性肝炎检疫技术规范

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

食用犬edibledog

由人工养殖用做食用的犬只。3.2

聚合酶链反应polymerasechainreaction

对特定的DNA片段在体外进行快速扩增的检测方法。

4检测

4.1检测项目

布氏杆菌病、犬瘟热、犬细小病毒病、狂犬病、犬传染性肝炎、钩端螺旋体病和利什曼病。

4.2检测方法

4.2.1布氏杆菌病

按GB/T18646-2018规定的PCR执行。

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DB22/T3038—2019

4.2.2犬瘟热

按GB/T27532-2011规定的RT-PCR执行。

4.2.3犬细小病毒病

按GB/T27533-2011规定的PCR执行。4.2.4狂犬病

按GB/T36789-2018规定执行。

4.2.5犬传染性肝炎

按SN/T4749-2017规定执行。4.2.6钩端螺旋体病

按附录A规定执行。

4.2.7利什曼病

按附录B规定执行。

5废弃物处理

按NY/T1948规定执行。

6档案管理

按NY/T2961规定执行。

3

DB22/T3038—2019

附录A（规范性附录）

钩端螺旋体病荧光PCR检测方法

A.1试剂

A.1.1DNA提取试剂盒。

A.1.2荧光PCR预混液。

A.1.3引物与探针，见表A.1。

表A.1引物与探针序列及浓度

名称

序列

浓度

上游引物F

CCCGCGTCCGATTAG

10pmol/μL

下游引物R

TCCATTGTGGCCGRACAC

10pmol/μL

探针

FAM-CTCACCAAGGCGACGATCGGTAGC-TAMRA

10pmol/μL

A.2步骤

A.2.1核酸提取

采集临床检测疑似病犬淋巴结，按DNA提取试剂盒方法提取DNA模板。A.2.2荧光PCR扩增体系

检测样本反应体系见表A.2，同时设阴性、阳性对照。

表A.2样品反应体系

体系组分

用量

2╳PCR预混液

10.0μL

无酶核酸水

5.9μL

上游引物F

0.8μL

下游引物R

0.8μL

探针溶液

0.5μL

DNA模板

2.0μL

总量

20.0μL

A.2.3荧光PCR的扩增条件设置

将PCR管放入荧光PCR仪，扩增参数见表A.3。

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DB22/T3038—2019

表A.3扩增参数

温度

时间

循环次数

95℃

30s

1

95℃

15s

40

60℃a

1min

注：a荧光收集设置每次循环的退火延伸时进行。

A.3结果判定

A.3.1条件设定

读取检测结果。阈值设定原则以阈值线刚好超过正常阴性对照品扩增曲线的最高点，不同仪器可根据仪器噪音情况进行调整。

A.3.2