DB11T 819-2011 锦鲤疱疹病毒病诊断技术规范.docxVIP

ICS11.220B41

备案号：31304-2011DB11

北京市地方标准

DB11/T819—2011

锦鲤疱疹病毒病诊断技术规范

TechnicalprotocolfordiagnosisofKoiHerpesvirusDisease

2011-08-09发布2011-12-01实施

北京市质量技术监督局发布

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DB11/T819—2011

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由北京市农业局提出。

本标准由北京市农业标准化技术委员会归口。本标准由北京市农业局组织实施。

本标准起草单位：北京市水产技术推广站。

本标准主要起草人：王姝、徐立蒲、张振国、王静波、曹欢、贾丽、殷守仁。

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DB11/T819—2011

锦鲤疱疹病毒病诊断技术规范

1范围

本标准规定了锦鲤疱疹病毒病（KHVD）的样品要求、临床症状及流行病学特征、PCR检测、结果判定。

本标准适用于锦鲤疱疹病毒病的诊断。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682—2008分析实验室用水规格和试验方法SC/T7103水生动物产地检疫采样技术规范

3缩略语

下列缩略语适用于本文件。

KHV：锦鲤疱疹病毒（Koiherpesvirus）

KHVD：锦鲤疱疹病毒病（Koiherpesvirusdisease）PCR:聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction）

DNA：脱氧核糖核酸（Deoxyribonucleicacid）Taq酶：TaqDNA聚合酶（TaqDNApolymerase）

dNTP：脱氧核糖核苷三磷酸（Deoxyribonucleosidetriphosphate）

4样品要求

4.1水温

采集样品时的水温应在16℃~32℃。4.2品种

采样品种为锦鲤或鲤。

4.3数量

按照SC/T7103执行。

4.4状态

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采集的样品不得腐败。

4.5信息采集

需采集鲤或锦鲤发病情况、混养其它鱼类发病情况、采样水温等信息。

5锦鲤疱疹病毒病临床症状及流行病学特征

5.1患KHVD的锦鲤和鲤，具有下列临床症状：

——最显著的特征为烂鳃,鳃出血并产生大量黏液,鳃丝溃烂；

——体表出现苍白的块斑和水泡；鳍条和尾鳍充血；鳞片上出现血丝；——眼球凹陷；

——口腔和腹部充血和出血。

5.2患KHVD的锦鲤和鲤，具有下列流行病学特征：

——混养池塘中,只有鲤或锦鲤（且不论大小）生病和死亡,而其它种类，如金鱼、草鱼等无此现象；

——水温在18℃~30℃时,特别是在25℃~28℃时,鲤或锦鲤大量死亡,当水温升高或降低时,死亡现象下降或停止；

——死亡极快，一条健康鱼从出现临床症状到死只有24h～48h；死亡率极高，疾病发生后在10天内,死亡率可达80%～100%。

6PCR检测方法

6.1试剂和材料

6.1.1水：符合GB/T6682—2008中一级水的规格。

6.1.2KHV阳性核酸片断：由农业部指定机构提供。

6.1.3Taq酶：－20℃保存，不能反复冻融或温度剧烈变化。

6.1.4dNTP：10mmoL/L。

6.1.5氯化镁溶液浓度：25mmoL/L。

6.1.6扩增KHV的TK基因中的409bp片断的引物：浓度为100pmoL/μL。其序列如下：KHV-TK-F:5’-GGG-TTA-CCT-GTA-CGA-G-3’；

KHV-TK-R:5’-CAC-CCA-GTA-GAT-TAT-GC-3’。

6.1.7扩增KHV的Sph基因中292bp片断的引物：浓度为100pmoL/μL。其序列如下：

KHV-Sph-F：5’-GAC-ACC-ACA-TCT-GCA-AGG-AG-3’；KHV-Sph-R：5’-GAC-ACA-TGT-TAC-AAT-GCT-CGC-3’。

6.1.8DEPC水：用焦碳酸二乙酯（DEPC）处理过的水。

6.2器材和设备

6.2.1普通冰箱和超低温冰箱。

6.2.2组织研磨器。

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