种子扩大培养.pptVIP

措施：孢子培养的时间应该控制在孢子量多、孢子成熟、发酵产量正常的阶段终止培养。一般来说，衰老的孢子不如年轻的孢子，因为衰老的孢子已在逐步进入发芽阶段，核物质趋于分化状态。过于衰老的孢子会导致生产能力的下降。培养时间3，培养时间和冷藏时间斜面冷藏对孢子质量的影响与孢子成熟程度有关。如土霉素生产菌种孢子斜面培养4天左右即于4?C冰箱保存，发现冷藏7~8天菌体细胞开始自溶。而培养5天以后冷藏，20天未发现自溶。01冷藏时间对孢子的生产能力也有影响。例如在链霉素生产中，斜面孢子在6?C冷藏两个月后的发酵单位比冷藏一个月降低18%，冷藏3个月后降低35%。02冷藏时间4，接种量接种量大小影响到培养基中孢子的数量，进而影响菌体的生理状况。孢子的质量01培养基02培养条件03种龄04接种量05二、影响种子质量的因素及控制营养成分适合种子培养的需要选择有利于孢子发芽和菌体生长的培养基；营养上要易于被菌体直接吸收和利用；营养成分要适当丰富和完全，氮源和维生素含量要高营养成分要尽可能与发酵培养基相近。1，培养基温度通气量在种子罐中培养的种子除保证供给易被利用的培养基外，有足够的通气量可以提高种子质量。例如，青霉素的生产菌种在制备过程中将通气充足和不足两种情况下得到的种子分别接入发酵罐内，它们的发酵单位可相差1倍。但也有例外，例如土霉素生产菌，一级种子罐的通气量小对发酵有利。2，培养条件3，种龄种龄：是指种子罐中培养的菌丝体开始移入下一级种子罐或发酵罐时的培养时间。通常种龄是以处于生命力极旺盛的对数生长期，菌体量还未达到最大值时的培养时间较为合适。时间太长，菌种趋于老化，生产能力下降，菌体自溶；种龄太短，造成发酵前期生长缓慢。不同菌种或同一菌种工艺条件不同，种龄是不一样的，一般需经过多种实验来确定。嗜碱性芽孢杆菌生产碱性蛋白酶，12小时最好。4，接种量种子质量的最终指标是考察其在发酵罐中所表现出来的生产能力。因此首先必须保证生产菌种的稳定性，其次是提供种子培养的适宜环境保证无杂菌侵入，以获得优良种子。01菌种稳定性的检查02无（杂菌）检查03三、种子质量的控制措施菌丝形态、菌丝浓度和培养液外观（色素、颗粒等）1霉菌、放线菌：菌丝粗壮、对某些染料着色力强、生长旺盛、菌丝分枝情况和内含物情况好。3单细胞：菌体健壮、菌形一致、均匀整齐，有的还要求有一定的排列或形态；21，细胞或菌体四、种子质量标准2，生化指标种子液的糖、氮、磷的含量和pH变化。3，产物生成量在抗生素发酵中，产物生成量是考察种子质量的重要指标，因为种子液中产物生成量的多少间接反映种子的生产能力和成熟程度。4，酶活力种子液中某种酶的活力，与目的产物的产量有一定的关联。菌种生长速度，过快或过慢菌丝结团菌丝粘壁五、种子异常分析谷氨酸发酵的菌种扩大培养第三节实例一、谷氨酸发酵的菌种扩大培养斜面菌种→一级种子培养→二级种子培养→发酵罐1，斜面菌种的培养菌种的斜面培养必须有利于菌种生长而不产酸，并要求斜面菌种绝对纯，不得混有任何杂菌和噬菌体，培养条件应有利于菌种繁殖，培养基以多含有机氮而不含或少含糖为原则。(1)斜面培养基组成葡萄糖0.1％蛋白陈1.0％牛肉膏1.0％氯化钠0.5％琼脂2.0~2.5％PH7.0~7.2（传代和保藏斜面不加葡萄糖）(2)培养条件：33~34℃，培养18~24h2，一级种子培养一级种子培养的目的在于大量繁殖活力强的菌体，培养基组成应以少含糖分，多含有机氮为主，培养条件从有利于长菌考虑。培养基组成葡萄糖2.5％尿素0.5％硫酸镁0.04％磷酸氢二钾0.1％玉米浆2.5~3.5％(按质增减)硫酸亚铁、硫酸锰各2ppmPH7．0培养条件用1000mL三角瓶装入培养基200mI，灭菌后置于冲程7．6cm、频率96次／min的往复式摇床上振荡培养12h，培养温度33~34℃一级种子质量要求种龄：12hpH值：6.4±0.1光密度：净增OD值0.5以上残糖：0.5％以下无菌检查：(-)噬菌体检查：(-)镜检：菌体生长均匀、粗壮，排列整齐革兰氏阳性反应。3，二级种子培养为了获得发酵所需要的足够数量的菌体，在一级种子培养的基础上进而扩大到种子罐的二级种子培养。种子罐容积大小取决于发酵罐大小和种量比例。培养基组成**生产啤酒的酵母菌一般保存在麦芽汁琼脂或MYPG培养基（培养基配制：3克麦芽浸出物，3克酵母浸出物，5克蛋白胨，10克葡萄