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串联IL-2的犬瘟热病毒F-H融合基因重组乳酸杆菌的构建与表达

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串联IL-2的犬瘟热病毒F-H融合基因重组乳酸杆菌的构建与表达

摘要：犬瘟热病毒（CDV）是一种高度传染性疾病，对犬类健康构成严重威胁。本研究旨在构建一个含有犬瘟热病毒F-H融合基因的乳酸杆菌表达载体，并对其表达进行验证。通过PCR扩增、基因克隆、重组质粒构建和转化等实验技术，成功构建了含有CDVF-H融合基因的乳酸杆菌表达载体。表达结果显示，重组乳酸杆菌能够稳定表达F-H融合蛋白，为CDV疫苗的研究提供了新的思路。

犬瘟热病毒（CDV）是一种单股负链RNA病毒，感染犬类后会导致严重的呼吸道、消化道和神经系统症状，甚至死亡。目前，CDV疫苗的研究已成为我国兽医领域的重要课题。乳酸杆菌作为一种益生菌，具有安全性高、易于储存等优点，被广泛应用于动物疫苗的构建。本研究旨在构建一个含有犬瘟热病毒F-H融合基因的乳酸杆菌表达载体，并对其表达进行验证，以期为CDV疫苗的研究提供新的思路。

一、引言

1.1犬瘟热病毒概述

(1)犬瘟热病毒（CanineDistemperVirus，CDV）是一种单股负链RNA病毒，属于副黏病毒科。该病毒主要感染犬科动物，尤其是幼犬，对犬类健康造成严重威胁。CDV的感染率高达100%，死亡率可高达95%，给全球犬类养殖业带来巨大经济损失。自20世纪50年代以来，CDV已在全球范围内广泛传播，成为犬类常见且危害严重的传染病之一。

(2)CDV病毒具有高度的传染性和致病性，主要通过空气飞沫、接触传播。病毒侵入犬体后，首先攻击犬的呼吸道上皮细胞，随后进入血液，引起病毒血症。随后，病毒感染犬的消化道、神经系统、肝脏、肾脏等多个器官，导致犬出现发热、呼吸困难、腹泻、呕吐、神经症状等症状。CDV感染可分为急性型和慢性型，急性型CDV感染症状明显，病程短，但死亡率高；慢性型CDV感染病程长，症状相对较轻，但容易反复发作。

(3)研究表明，CDV病毒基因组全长约1500个核苷酸，编码6个结构蛋白和多种非结构蛋白。其中，F蛋白是CDV的主要表面蛋白，具有高度的免疫原性。近年来，随着分子生物学技术的快速发展，研究者们对CDV的分子结构、致病机制、免疫学特性等方面进行了深入研究。例如，通过对CDVF蛋白基因的克隆、表达和纯化，为CDV疫苗的研究提供了重要基础。此外，CDV的基因变异和进化也是研究者关注的重点，这有助于了解CDV的传播规律和制定有效的防控策略。

1.2乳酸杆菌在疫苗研究中的应用

(1)乳酸杆菌作为一种益生菌，近年来在疫苗研究领域展现出巨大的潜力。其安全性高、易于储存、可口服等优点使其成为疫苗研究的理想载体。乳酸杆菌可以携带和表达外源基因，从而在宿主体内诱导免疫反应，实现疫苗的效果。例如，将流感病毒、轮状病毒、肺炎球菌等病原体的抗原基因克隆到乳酸杆菌中，可以制备相应的活载体疫苗。

(2)在疫苗研究中，乳酸杆菌活载体疫苗具有多方面的优势。首先，乳酸杆菌在宿主体内定植，能够直接刺激宿主的免疫系统，提高抗原的免疫原性。其次，乳酸杆菌作为益生菌，可以调节宿主的肠道菌群平衡，增强宿主的免疫功能。此外，乳酸杆菌活载体疫苗的制备工艺简单，成本较低，便于大规模生产和使用。

(3)近年来，乳酸杆菌在疫苗研究中的应用取得了显著成果。例如，针对幽门螺杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌等肠道病原体的疫苗研究取得了突破性进展。此外，乳酸杆菌在肿瘤疫苗、疫苗佐剂等方面的研究也取得了一定的成果。这些研究表明，乳酸杆菌作为一种新型疫苗载体，具有广阔的应用前景。随着科学技术的不断发展，乳酸杆菌在疫苗研究中的应用将更加广泛。

1.3本研究的目的与意义

(1)本研究旨在构建一个含有犬瘟热病毒F-H融合基因的乳酸杆菌表达载体，并对其表达进行验证。犬瘟热病毒（CDV）作为一种高度传染性的病毒，对犬类健康构成了严重威胁。目前，针对CDV的防控措施主要依赖于疫苗接种，然而传统的灭活疫苗和亚单位疫苗在免疫效果和安全性方面仍存在一定的局限性。因此，开发一种新型、安全、高效的CDV疫苗对于犬类疾病的防控具有重要意义。

本研究通过将CDV的F-H融合基因克隆到乳酸杆菌中，构建活载体疫苗，旨在利用乳酸杆菌的优势特性，提高疫苗的免疫原性和安全性。乳酸杆菌作为一种益生菌，具有广泛的应用前景，其安全性高、易于储存和口服等特点，使其成为疫苗研究中的理想载体。此外，乳酸杆菌能够在宿主体内定植，持续刺激免疫系统，增强宿主的免疫记忆，从而提高疫苗的免疫效果。

(2)本研究构建的含有CDVF-H融合基因的乳酸杆菌表达载体具有以下潜在意义