T CVMA 215—2025 口蹄疫非结构蛋白3ABC时间分辨荧光免疫层析抗体检测方法.pdfVIP

ICS11.220

CCSB41

团体标准

T/CVMA215—2025

口蹄疫非结构蛋白3ABC时间分辨荧光免疫

层析抗体检测方法

TRFIAfordetectionofantibodiesagainstFMDV3ABCprotein

2025-2-14发布2025-2-14实施

中国兽医协会发布

口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC时间分辨荧光免疫层析抗体检测方法

1范围

本文件规定了口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC时间分辨荧光免疫层析抗体检测方法的试剂与耗材、技

术原理、实验前准备、操作步骤、结果计算、试验成立条件及结果判定等内容。

本文件适用于检测猪、牛、羊全血或血清中的口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC抗体。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

时间分辨荧光免疫层析技术Timeresolvedfluorescenceimmunochromatographicassay；TRFIA

以时间分辨荧光微球作为示踪物，将抗原抗体固定在硝酸纤维素膜上，通过层析来呈现免疫反应结

果的一种新型免疫分析技术。

4技术原理

采用时间分辨荧光免疫层析技术和双抗原夹心法相结合，检测口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC抗体。

通过样品与荧光微球标记物沿层析膜移动，样品中口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC抗体与荧光微球标记

物、检测线（T线）上的抗原结合而产生荧光信号值（T值），荧光微球标记物继续移动与质控线（C

线）上的抗体结合产品荧光信号值（C值），荧光信号通过仪器收集转换，计算出T/C值即为待检样品

口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC抗体值。

5试剂与耗材

5.1口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC时间分辨免疫荧光层析抗体检测卡，按照附录A制备。

5.2相关试剂的配制，按照附录B准备。

5.3便携式免疫荧光分析仪及配套ID卡，能在荧光检测波段365/610nm条件下检测，按照附录C

操作。

5.4微量毛细采样管（10µL）。

5.5微量移液器（量程：10µL、20µL、200µL）。

5.6注射器（5mL）。

6样品

6.1样品的采集与处理

按照NY/T541中的规定进行全血或血清样品的采集与处理，并做好个人防护。

6.2血清样品的采集与处理

按照NY/T541中规定进行样品的采集与处理。若需长时间保存，应将血清置-20℃以下保存，且应

避免反复冻融。

6.3全血样品的采集与处理

按照NY/T541中规定进行全血样品的采集与处理。运输时注意冷藏，确保样品清亮无污染。

7操作步骤

7.1取检测卡

将口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC时间分辨免疫荧光层析抗体检测卡放于平整、洁净的台面上，恢复

至室温。

7.2样品稀释

将微量毛细采样管取10μL全血或血清样品按照1:10比例加入到样品稀释液中混匀，稀释后的样品

应在1h内完成检测。可按照以下两种方式稀释：

a)离心管稀释：将检测样品在1.5mL离心管中做10倍稀释并混匀。

b)稀释板稀释：将检测样品在稀释板上做10倍稀释并混匀。

7.3加样及孵育

用移液枪吸取稀释好的样品100μL到加样孔内，室温下静置反应15min。

7.4仪器检测读数

读数前先将产品配套ID卡插入便携式荧光免疫分析仪，之后将完成反应的检测试纸加样孔朝里插

入便携式荧光免疫分析仪，点击“快速检测”进行读数。超过25min的检测结果无效。

8试验成立条件

当仪器完成读值后