T CVMA 218—2025 猪伪狂犬病毒gE抗体化学发光免疫分析检测方法.pdfVIP

ICS11.220

CCSB41

团体标准

T/CVMA218—2025

猪伪狂犬病毒gE抗体化学发光免疫分析

检测方法

ChemiluminescentimmunoassayfordetectionofpseudorabiesgEprotein

antibody

2025-2-14发布2025-2-14实施

中国兽医协会发布

猪伪狂犬病毒gE抗体化学发光免疫分析检测方法

1范围

本文件规定了猪伪狂犬病毒gE抗体化学发光免疫分析检测方法的技术原理、试剂与材料、仪器与

耗材、样品采集及保存、操作步骤、试验成立标准、结果判定标准等内容。

本文件适用于检测猪伪狂犬病毒gE抗体。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

NCU：抗体剂量值单位（Neuraminidasecomplementaryunit）

5技术原理

采用竞争法和化学发光技术结合的技术原理，用猪伪狂犬病病毒gE重组蛋白包被发光板，酶标单

克隆抗体与待检样品中的抗体竞争性的与包被抗原结合，通过抗原抗体反应，形成抗原-酶标抗体复合

物、抗原-待测抗体复合物；抗原-酶标抗体复合物催化发光底物液发出光子形成发光值，其发光强度与

猪伪狂犬病毒gE抗体的含量成反比。发光值越大，样品中猪伪狂犬病毒gE抗体水平越低；发光值越小，

说明样品中猪伪狂犬病毒gE抗体水平越高。根据样品发光值与校准品发光值的比值拟合校准品曲线，

计算猪伪狂犬病毒gE抗体。

6试剂与材料

6.1猪伪狂犬病毒gE重组蛋白，见附录A。

6.2酶标单克隆抗体（辣根过氧化物酶标记的猪伪狂犬病毒gE单克隆抗体）。

6.3猪伪狂犬病病毒gE重组蛋白包被板的制备，按照附录B。

6.4相关组分的配制，按照附录C。

7仪器与耗材

7.1化学发光免疫分析仪。

7.237℃恒温培养箱。

7.32℃~8℃冰箱、﹣20℃冰箱。

7.4单道微量移液器（0.5µL~10µL；10µL~100µL；20µL~200µL；100µL~1000µL）。

7.5多道移液器（300µL）。

7.6NCU反应板、血清稀释板（96孔一次性U型血凝板或96孔细胞培养板）。

7.7一次性注射器（5mL、10mL）。

8样品采集及保存

8.1样品采集

按照NY/T541中规定进行样品的采集与处理。按常规方法抽取2mL~3mL血液置洁净干燥的试管

中，静置约60min，待血液凝固后，4000r/min离心10min，分离血清（也可将血液样品静置约120min，

待血液凝固自然析出血清）。血清清亮，无溶血、无污染。

8.2血清样品的保存与运输

按照NY/T541中规定进行血清样品的存放与运输。血清样品置2℃~8℃条件下保存。若超过一周

检测，置于-20℃以下冷冻保存。

9操作步骤

9.1样品准备

将待检样品从2℃~8℃或-20℃冰箱取出，静置至室温备用。

9.2加样

取出猪伪狂犬病病毒gE重组蛋白包被板，每次实验需设置系列校准品1~6。首先在血清稀释板上

依次加入校准品1~6各30μL，其余各孔依次加入待检样品各30μL，再向以上各孔分别加入60μL酶标

单克隆抗体，震荡混匀；每孔吸取75μL转移至包被板对应孔内。

9.3温育

置