组织病理学制片技术.pptVIP

第二节组织切片法

(Tissuesectioning)组织切片法包括石蜡切片法、冰冻切片法、火棉胶切片法、树脂包埋薄切片法和大组织石蜡切片法等。常用的切片工具包括组织切片机、切片刀和自动磨刀机等。一、组织切片机和切片刀1.石蜡切片机2.火棉胶切片机3.恒冷箱切片机4.震动切片机石蜡切片机震动切片机恒冷箱切片机切片刀切片刀是切片机的重要部件，常见的有两种：一种为可重复使用的钢刀，一般有4cm、8cm、14cm、18cm、20～24cm等，根据切片刀的形态，有平凹型、深平凹型、平楔型、双凹型。另一种为一次性钢刀片，是一种薄型切片刀片，用于普通石蜡切片。使用时固定在特制的刀架上。各种切片刀的剖面图a平凹形b深平凹形c平楔形d双凹形石蜡切片机用一次性钢刀片组织切片(Tissuesectioning)01石蜡切片仍是目前各种切片制作方法中最常用、最普遍的一种方法。02备齐常用器具,如玻片、毛笔和铅笔或刻字笔。检查切片机的工作状态,将固件都拧紧，检查切片刀是否锋利,切片刀质量是保证切片的关键。如果使用一次性刀片,应根据切片情况及时调整刀刃位置。切片前的准备新载玻片的处理：先用清洁液浸泡12~24h,流水充分冲洗后,用蒸馏水洗3~5遍,95%酒精浸泡2h,用绸布擦干或用烘箱烤干备用。清洁液是用重铬酸钾和浓硫酸按比例配成的洗液。清洁玻片的方法重铬酸钾(g):浓硫酸(ml):蒸馏水(ml)=1:1:10;重铬酸钾:浓硫酸:蒸馏水=2:3:25;重铬酸钾:浓硫酸:蒸馏水=2:5:15。常用的有以下几种配方：盖玻片的处理：盖玻片可按以上方法处理，但因盖玻片很薄，以上处理程序应缩短。清洁液浸泡2h，流水冲洗。也可用以下方法清洗:盖玻片立排于卧式染缸(排2行，中间隔以载玻片)。松紧度以玻片可轻松转动为好，以下步骤应保持液体进入每个玻片间隙，玻片之间不能有气泡。用1%盐酸酒精浸泡2h，然后流水冲洗干净，再用蒸馏水冲洗数次。入95%酒精浸泡2~3h，无水酒精浸泡20min，倒掉酒精放60℃烘箱烤干备用。蜡块在冰箱中预冷，然后固定在切片机上。将切片刀装在刀架上。调整蜡块与刀的位置，使蜡块切面与刀刃接近。切片机多为轮转式，使用时左手执毛笔，右手旋转切片机转轮。先修出标本，直到组织全部暴露于切面为止，标本过小时修块应多加注意，大标本要切全。切出蜡带后，用毛笔轻轻挑起一端，用镊子夹起另一端，正面向上放入展片水槽中(水温一般低于蜡熔点10~12℃)，待切片展平后，即可进行捞片。切片制作过程切片时刀是由下向上运动，为得到完整的切片，防止组织出现刀纹裂缝，应将组织硬脆难切的部分放在上端(如皮肤组织的表皮部分，胃肠等组织的浆膜面等)。捞片时注意组织片的摆放位置，尽量整齐美观。要留出贴标签的空间，捞片时注意在切片和玻片之间不要留有气泡。捞好的切片应在60℃左右烤箱内烤至少30min。以防染色时脱片。石蜡切片制作时的注意事项(Attentions)组织的取材和固定；组织脱水、透明和浸蜡；切片组织块固定不牢时；切片刀和切片机；特殊要求切片的制作。第三节冰冻切片法

(Frozensectioning)冰冻切片可用于新鲜组织、甲醛固定的组织和低温冰箱冷藏的组织块等。已固定的组织块经流水冲洗后再进行切片。恒冷箱切片机半导体制冷切片机冰冻切片法提前开机预冷，一般工作温度设定在-22℃左右。待刀台、样品台和箱内达到设置温度后即可切片。顺序如下：①将组织用OCT粘在样品托后放置在速冻台上；②组织冻结后，将样品托固定到样品台上；③调整组织切面与刀刃位置，初步修出组织切面后，放下防卷板，关闭观察窗，开始切片。④切出的切片粘贴到载玻片上，直接冻存或吹干固定。二、冰冻组织的取材及保存方法（一）取材负责诊断的医师应亲自检查大体标本，做多切面详细检查，必要时可在解剖镜下观察。选取最具代表性的组织制片，必要时应多点取材。如切面有特殊要求，应向技术人员说明。取材和切片的剩余组织须进一步做石蜡切片进行对照，有利于病理医师对照阅片，不断提高观察冰冻切片的水平。保存方法组织速冻的方法很多，常用方法为液氮和干冰~丙酮法。液氮法：将组织块平放于瓶盖或标本盒等适当容器内，缓慢放入盛有液氮的容器内。当组织块冻结后，取出用铝箔包好，做好标记后入液氮罐或-70℃低温冰箱保存。可保存数月至数年。如短期内使用，可保存于-30℃冰箱。*上课请关手机（或调成振动，接电话到室外）。选修课自愿选择，试听一次，下次课班长提交选修课学生名单(包括email)。学分问题平时表现如：纪律、问答、作业。结课测验?