神经干细胞的研究现状与应用前景.ppt

（1）反复传代法：取3～4个月龄的人胚胎纹状体或孕14～16天小鼠、大鼠胚胎大脑，机械分离制作单细胞悬液。在含多种神经因子的无血清培养基中培养，实现NSC的体外稳定有效扩增。经过长期培养反复传代可使NSC得到纯化。（2）流式细胞术：Sasaki等采用流式细胞仪对约60种细胞表面抗原进行筛选，结果发现分选出的具有CD133+/CE34+/CD45-（细胞表面抗原）的细胞为NSC。（3）基因转导：Keyoung等利用腺病毒为载体,将置于归巢素和Msi1增强子和启动子控制下的绿色荧光蛋白基因导入人胚胎细胞,然后对胚胎细胞进行体外培养,只有NSC能特异性地出现绿色荧光蛋白。再利用流式细胞仪进行荧光筛选,能进一步将NSC收集起来。（4）免疫磁珠细胞分选法：利用磁珠表面的特异性抗体与NSC表面抗原结合，在磁场作用下使结合磁珠的NSC与其他细胞分离，从而得到较纯化的NSC。神经干细胞的分离与纯化第31页，共51页，星期日，2025年，2月5日神经干细胞的鉴定1990年，Lendahl的实验证实，神经干细胞的标志蛋白是神经上皮干细胞蛋白（nestin）．Nestin在神经胚形成时开始表达，随着神经细胞的迁移和分化的完成，Nestin的表达量逐渐下降甚至完全停止。目前，Nestin已被用于神经干细胞的鉴定。培养的小鼠神经干细胞胚胎小鼠脑侧室胚胎小鼠纹状体第32页，共51页，星期日，2025年，2月5日Sakakibara等人鉴定出一种RNA结合蛋白即Musashi,可作为NSC的标志物。(Sakakibaraetal.1996)E10E14Ventricularzoneofspinalcord第33页，共51页，星期日，2025年，2月5日m-Msi-1nestin(Sakakibaraetal.1996)对分离培养得到的NSC进行标记时发现：Nestin和Musashi呈双重阳性,且随着NSC分化成为神经元,二者的标记作用也消失,说明Musashi具有与Nestin相似的特异性和种间保守性。Nestin和Musashi作为早期原始神经细胞的标志物已被广泛地应用于NSC的鉴定。第34页，共51页，星期日，2025年，2月5日应用前景第35页，共51页，星期日，2025年，2月5日NSC原位诱导内源性NSC的自身激活理论依据：大量体外和在体实验已经证实成年脑中存在NSC。研究影响NSC增殖和分化的信号作用的实验证实：脑室管膜下区等部位的NSC在脑损伤发生后能够增殖，并迁移到受损部位并分化成新的神经细胞，取代受损脑组织细胞。存在困难：在大多数情况下,仅由内源性干细胞产生的神经组织可能不足以替代损伤后缺失的神经组织,尤其在脊髓、纹状体等神经组织发生很少的部位。可能原因：(1)原位诱导出功能特异的神经元可能需要多种刺激和特定细胞因子的作用。(2)患者中枢神经系统的干细胞缺陷或无法激活。第36页，共51页，星期日，2025年，2月5日异体神经干细胞移植依据：临床试验表明，移植胎儿脑组织治疗神经系统退行性疾病可以明显改善症状；在体外培养扩增的NSC移植到脑疾病动物模型脑内的实验表明，体外培养的NSC移植到脑内后能够迁移分化为特定部位的神经细胞，其分化方向与所处的微环境密切相关。问题：（１）但胎脑的来源有限，受伦理和法律上的束缚，限制研究的发展；（２）在研究细胞移植治疗帕金森病时发现,在体外实验中没有必需的因素干预下,NSC自然分化为多巴胺能神经元的比例只占细胞总数的0.5%～5%。因此，诱导NSC向修复所需的神经功能(目的)细胞分化成为研究的核心问题。第37页，共51页，星期日，2025年，2月5日关于神经干细胞的研究现状与应用前景第1页，共51页，星期日，2025年，2月5日主要内容基本知识神经干细胞的定义、特点、标志、分布及分化因素等基本知识成年神经干细胞的研究现状研究方法神经干细胞的来源、分离、培养及鉴定方法应用前景神经干细胞技术在神经系统疾病治疗中的应用神经干细胞与神经心理学第2页，共51页，星期日，2025年，2月5日基本知识第3页，共51页，星期日，2025年，2月5日干细胞（Stemcell，SC）是一类具有自我更新（self-renewing）能力的多潜能细胞，即干细胞保持未定向分化状态和具有增殖能力，在合适的条件或给予合适的信号，它可以分化成多种功能细胞或组织器官，医学界称其为“万用细胞”，也有人通俗而形象地称其