酶的分子结构与功能.ppt

非竞争性抑制曲线第94页，共134页，星期日，2025年，2月5日抑制剂仅与酶和底物形成的中间产物(ES)结合，使中间产物ES的量下降。这样，既减少从中间产物转化为产物的量，也同时减少从中间产物解离出游离酶和底物的量。这种抑制作用称为反竞争性抑制作用。定义反竞争性抑制作用的抑制剂仅与酶-底物复合物结合第95页，共134页，星期日，2025年，2月5日反应模式E+SE+PES+IESI++ESESESIEP第96页，共134页，星期日，2025年，2月5日特点：抑制剂只与酶－底物复合物结合；抑制程度取决与抑制剂的浓度及底物的浓度；动力学特点：Vmax降低，表观Km降低。抑制剂↑1/V1/[S]无抑制剂?第97页，共134页，星期日，2025年，2月5日反竞争性抑制曲线第98页，共134页，星期日，2025年，2月5日各种可逆性抑制作用的比较?第99页，共134页，星期日，2025年，2月5日E与S形成ES复合物的反应是快速平衡反应，而ES分解为E及P的反应为慢反应，反应速率取决于慢反应即V=k3[ES]。S的总浓度远远大于E的总浓度，因此在反应的初始阶段，S的浓度可认为不变即[S]=[St]。米－曼氏方程式推导基于两个假设：第62页，共134页，星期日，2025年，2月5日单底物、单产物反应；酶促反应速率一般在规定的反应条件下，用单位时间内底物的消耗量和产物的生成量来表示；反应速率取其初速率，即底物的消耗量很小（一般在5﹪以内）时的反应速率底物浓度远远大于酶浓度。研究前提：第63页，共134页，星期日，2025年，2月5日米氏方程推导过程:游离酶浓度=[E]-[ES]ES生成速度=k1([E]-[ES])[S]ES分解速度=k2[ES]+k3[ES]当稳态时：ES生成速度=ES分解速度k1([E]-[ES])[S]=k2[ES]+k3[ES]第64页，共134页，星期日，2025年，2月5日（[E]-[ES]）[S]k2+k3[ES]k1[ES]=因V=k3[ES]，当所有E被S饱和时，即达到最大速度，此时[ES]=[E]，Vmax=k3[ES]=k3[E]。代入上式：==Km[E][S]Km+[S]V=k3[E][S]Km+[S]Vmax[S]Km+[S]=整理：V=Km+[S]k3[E][S]（2）（1）第65页，共134页，星期日，2025年，2月5日米-曼氏方程解释：当[S]??Km时，V=(Vmax/Km)[S],即V与[S]成正比。当[S]??Km时，V?Vmax，即[S]?而V不变。ＶVmax[S]Km+[S]＝──第66页，共134页，星期日，2025年，2月5日（二）Km与Vm是有意义的酶促反应动力学参数Km值的推导Km与Vmax的意义第67页，共134页，星期日，2025年，2月5日当反应速率为最大反应速率一半时：Km值的推导Km=[S]Km值等于酶促反应速率为最大反应速率一半时的底物浓度，单位是mol/L。2=Km+[S]VmaxVmax[S]VmaxV[S]KmVmax/2第68页，共134页，星期日，2025年，2月5日Km与Vmax的意义定义：Km等于酶促反应速率为最大反应速率一半时的底物浓度。意义：Km是酶的特征性常数之一，只与酶的结构、底物和反应环境（如，温度、pH、离子强度）有关，与酶的浓度无关。Km可近似表示酶对底物的亲和力，Km愈小，E对S的亲合力愈大，Km愈大，E对S的亲合力愈小。同一酶对于不同底物有不同的Km值。Km值第69页，共134页，星期日，2025年，2月5日Vmax定义：Vm是酶完全被底物饱和时的反应速率，与酶浓度成正比。Vmax=K3[E]如果酶的总浓度已知，可从Vmax计算酶的转换数(turnovernumber)，即动力学常数k3。可用来比较每单位酶的催化能力。K3是酶的转换数。既：当酶完全被底物饱和时,单位时间内每个酶分子催化底物转化成产物的分子数.K3=Vmax/[E]E+Sk1k2k3ESE+P第70页，共134页，星期日，2025年，2月5日1.双倒数作图法(doublereciprocalplot)，又称为林