细胞融合和单克隆抗体.pptVIP

细胞融合和单克隆抗体1细胞融合技术最大的优点是什么？3什么叫动物细胞融合？2动物细胞融合技术的应用4促进细胞融合的方法有哪些?5动物细胞融合的过程？6植物体细胞杂交与动物细胞融合有哪些异同？一、动物细胞融合（细胞杂交）一、动物细胞融合（细胞杂交）1、动物细胞融合概念：2、促进细胞融合的方法：物理法化学法生物法离心、振动、电激(效率高、伤害小、易操作)聚乙二醇（PEG）灭活的病毒（灭活的仙台病毒）指用自然或人工方法使两个或多个不同的细胞融合成一个细胞的过程。3、动物细胞融合过程灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜连接细胞融合，形成杂种细胞原理：细胞膜的流动性细胞融合是正常的生命活动受精作用两个细胞正在融合4、植物体细胞杂交和动物细胞融合比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合原理融合前处理诱导方法用途细胞膜的流动性、植物细胞的全能性细胞膜的流动性用纤维素酶、果胶酶去壁用胰蛋白酶使细胞分散物理、化学方法物理、化学、生物方法获得完整植株主要用于制备单克隆抗体细胞融合技术最大的优点：动物细胞融合技术的应用：利用杂交瘤技术，制备单克隆抗体。细胞融合技术突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。12因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。02思考讨论：为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？不灭活行吗？01回顾（1）、抗体的化学本质？（2）、抗体由什么细胞产生？（3）、抗体的作用特点？（4）、抗体的分布？思考：如何获取某种特定抗体？二：动物细胞融合的成功应用

——单克隆抗体的制备1、抗体的传统生产方法再从动物血清中分离抗体该法制备抗体的特点：输入浆细胞动物体内某抗体某抗原产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。1用单个B细胞进行克隆，得到的细胞群能够分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体，这种抗体就叫做单克隆抗体。2怎样才能获得单克隆抗体？3提示1：仅用细胞培养技术可行吗？4提示2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？5提示3：有什么方法能使B细胞产生抗体的能力和肿瘤细胞无限增殖能力同时具备呢？2.什么叫单克隆抗体一个B淋巴细胞——只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞——能无限增殖杂交瘤细胞既能分泌一种特异性抗体又能无限增殖1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒设想：米尔斯坦(阿根廷)和科勒(德国)因此在1984年获诺贝尔奖。3、单克隆抗体的制备过程（自学与思考）1）在从小鼠体内取B淋巴细胞前应对小鼠作何种处理？为什么要这样处理？2）从小鼠何处获取B淋巴细胞？3）如只考虑两两融合，可能出现哪些融合类型细胞？4）是否所有杂交瘤细胞都能产生某一特定抗体？5）由特定的B淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞融合成的杂交瘤细胞具有什么特点？6）最后可以通过哪些途径大量获取抗体？1.动物特异性免疫杂交细胞灭活的病毒等手段小鼠骨髓瘤细胞B淋巴细胞经免疫的小鼠提取杂交瘤细胞第一次筛选用特定的选择性培养基体外培养注射到小鼠腹腔提取单克隆抗体2.注意B淋巴细胞是一个系列。（B1,B2,B3,---Bn）3.细胞融合:三种融合方式4.第一次筛选：只有杂交瘤细胞存活。同种细胞的融合在此培养基上不能存活，但杂交瘤细胞也是一个系列,。5.第二次筛选：每孔只放一个杂交瘤细胞。“克隆化培养”每个杂交瘤细胞，并进行“单一抗体检测”，“检测阳性”的孔内即是所需要的杂交瘤细胞。第二次筛选能产生特定抗体、培养条件下能无限增殖的杂交瘤细胞多孔培养板上6.选择所需要的杂交瘤克隆细胞群单抗的制备过程要点：动物特异性免疫分离B淋巴细胞（B）；找到骨髓瘤细胞（G）。注意B淋巴细胞是一个系列。（B1,B2,B3,---Bn）细胞融合——三种融合方式:（BB;BG;GG）第一次筛选：在“选择培养基培养”上培养筛选杂交瘤细胞（只有BG杂交瘤细胞存活。但BG杂交瘤细胞也是一个系列：如B1G,B2G---BnG。而BB,GG在此培养基上不能存活。）第二次筛选：在“多孔培养板上”培养杂交瘤细胞系列，每孔只放一个杂交瘤细胞。“克隆化培养”每个杂交瘤细胞，并进行“单一抗体检测”，“检测阳性”的孔内即是所需要的杂交瘤细胞。选择所需要的杂交瘤克隆细胞群，体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖。提取单克隆抗体。1)、