茶专《茶树病虫害防治》实验.pptVIP

实验四、茶树病害主要病原物形态观察实验项目茶树病害主要病原物形态观察实验性质验证性实验实验内容本实验借助提供的实验材料，观察与认识各种真菌、病原细菌、线虫的基本形态特征，了解寄生性种子植物的外部形态。教学目的和要求认识真菌营养体和繁殖体及无性孢子和有性孢子的特征；识别常见植物病原细菌、线虫和寄生于茶上的种子植物。教学重点教学难点重点：掌握植物病原真菌的主要特征及细菌的观察方法。难点：五个亚门真菌的主要特征，细菌的革兰氏染色方法。材料病害新鲜材料、标本、挂图，病原菌玻片、多媒体课件等。1设备显微镜、扩大镜、载玻片、盖玻片、镊子、挑针、解剖刀、小剪刀、培养皿、贮水小滴瓶、乳酚油滴瓶、新刀片、毛笔等。2材料与设备鞭毛菌观察卵孢子观察任取一种霜霉病的病斑枯死组织，剪成3-4mm见方的小块放在小试管内，随即滴入15％KOH溶液(或加乳酚油亦可)于酒精灯上加热透明至枯死组织脱去黄褐色为止，冷却后取一小片病组织放在载玻片中央，滴一滴蒸馏水或乳酚油，加盖玻片镜检组织内的卵孢子。游动孢子的观察取一清洁凹载玻片，丁凹心处四周涂少量凡士林油备用；另取一张清洁盖玻片放平，在其中央滴加1滴蒸馏水，用解剖刀从霜霉病新鲜材料叶背面刮取新形成的孢子囊，置于盖玻片的小水滴中；接着将盖片翻转过来，轻轻放在凹玻片上，使盖片边缘与凹心周围的凡士林粘合，以防水滴蒸发，然后将玻片平放在培养皿内，于20℃左右的温度下经30min培养后镜检，即可看到游动孢子的形成。孢囊梗和孢子囊的观察用挑针挑取瓜果腐霉菌的絮状菌丝体于载玻片水滴中，加盖玻片制成临时装片进行镜检，观察菌丝体、孢囊梗与孢子囊。也可用解剖刀从霜霉病材料背面剖取霉状物，制成临时装片观察孢囊梗和孢子囊。实验内容0102接合孢子观察镜检根霉菌接合孢子装片。营养体和无性繁殖体观察用丛根霉菌体材料，用挑针挑取孢子囊呈白色和黑色的分别制成临时装片，镜检比较其区别，注意匍匐菌丝有无分隔、假根形态、孢囊梗着生部位，黑色孢子囊破裂后，散出孢囊孢子形态、大小、色泽。（二）接合菌的观察观察子囊盘形状及着生情况（示范）。04观察小麦赤霉病子囊壳形状及着生情况及其内子囊着生情况(示范)。05子囊菌菌丝体及无性孢子观察挑取白粉病病叶表面的白色粉霉状物制片，置显微镜下观察，注意菌丝有无分隔，分生孢子梗形态及分生孢子着生情况。01子囊菌有性孢子及子实体观察观察白粉菌的闭囊果——挑取白粉病病叶表面的黑色小颗粒制片，在低倍镜下观察闭囊果的形态、颜色。用挑针在闭囊果上方的盖玻片上轻压，挤出闭囊果中的子囊；观察白粉病菌闭囊果内子囊的数目。03观察白粉病病菌菌丝伸入寄主组织的吸器。02（三）子囊菌观察锈菌冬孢子萌发的观察结合当地情况任选一种冬孢子萌发材料(如桧柏上梨胶锈菌的冬孢子角)，用挑针挑取萌发的冬孢子少许，制成临时装片镜检，观察担子的分隔，担孢子的数目及形态特征。夏孢子堆的观察任选一种夏孢子堆尚未破裂的小麦秆锈，叶锈或条锈病材料，制成临时装片镜检。冬孢子的形态观察取麦类锈病、蚕豆锈病或菜豆锈病带冬孢子堆的材料，用解剖刀刮取冬孢子制片进行观察。担子菌大型子实体观察，观察木耳、灵芝及蘑菇的外部形态。（四）担子菌观察观察茶轮斑病病叶的症状特点，注意病部的黑色小粒的着生情况，用挑针或用刀片切取小黑粒，在镜下观察，注意分生孢子形状、大小及颜色。01病组织内菌体观察，为了能真切地看清菌体，除用切片法观察外，有的材料需要进行透明而后观察，较常用的透明方法是水合氯醛法。03观察黑腐病病菌的菌丝分枝角度和分枝交界处的缢束现象。02010203（五）半知菌的观察（六）细菌基本形态的观察取纽菌三种形态的装片镜检。革兰氏染色反应的观察（1）涂片取两块清洁的载玻片平放桌面上各滴加l滴无菌水，用接种环分别从新鲜材料溢脓处和菌种中挑取少量细菌，涂成菌膜。（2）固定将涂片在酒精灯火焰上方通过数次，使菌膜干燥固定。（3）染色(1)在菌膜上加1滴结晶紫液染色1min；(2)用洗瓶把多余的结晶紫液轻轻冲去，加碘液冲去残水；(3)再加1滴碘液媒染1min；(4)再水洗去碘液，滤纸吸去多余水分；（4）滴加95％酒精，脱色20-30s。；(6)用水洗去酒精，滤纸吸干后再以藏花红复染0.5～1min；(7)用水洗去复染剂，吸干备用。（5）镜检从低倍镜到高倍镜，细菌被染成蓝紫色，为革兰氏染色阳性反应，红色为阴性反应。（6）细菌的鞭毛观察用示范片供镜检。（七）线虫的观察取花生根线虫或茶苗根结线虫病材料，以挑针轻轻挑开根结，小心挑取乳白色小颗粒状物，置于载玻片中镜检，观察呈梨形的雌虫的特征；另将虫瘿用