组织制片技术概述.pptVIP

除去组织中渗入的固定液和一些由固定液产生的沉淀、结晶和色素的步骤称为固定后处理。主要有以下六种方法：流水冲洗：重铬酸钾、甲醛固定的组织，要经过流水冲洗24h。酒精脱黄:含有苦味酸的固定液固定的组织，必须经过70％乙醇洗涤脱去黄色。02010304五、固定后处理碘酒脱汞：氯化汞固定的组织有汞结晶，碘酒浸泡除去。01脱甲醛色素：甲醛长期固定的组织易产生黑色结晶，70％乙醇－浓氨水溶液除去。02组织漂白：锇酸固定的组织为黑色。漂白液漂白才上色。03脱钙：含钙组织骨、牙齿和内耳。04脱水定义用某种能与透明剂互溶的化学试剂将组织内的水分逐渐置换出来的过程。要点：缓慢、彻底、勿过度。常用脱水剂乙醇、丙酮、正丁醇乙醇固定剂+脱水剂上行酒精脱水70%（30%）→100%，以10％递增。丙酮脱水强，但对组织的收缩脆化作用也强；主要用于组织的固定兼脱水或切片的快速脱水，以保护某些特殊染色的标本不被褪色。组织不经过切片制成观察标本的方法。非组织切片法涂片、压片、铺片、磨片、消化分离标本、活体标本、整装标本、血管注射标本。非组织切片法的种类0201涂片将所采的血液、骨髓或者脱落细胞涂抹于载玻片上经瑞氏、姬姆萨染色、常规HE染色。压片先将组织处理成小块物质，然后用化学药品进行软化和染色，再用盖玻片压封于载玻片上。例如运动终板和寄生虫标本等。铺片：将需要观察的薄片组织用手工的方法直接铺于载玻片上，然后经过固定、染色等程序制成。例如蛙的肠系膜铺片，大白鼠的皮下组织铺片等。磨片：对于骨，牙齿等组织，不经脱钙和切片，直接在磨石上用手工磨成大约50微米左右的薄片，然后再进行染色封固在载玻片上。消化分离标本：先将组织分离成小块，然后利用相应的化学物质将细胞间质消化溶解，再用机械分离的方法，如水的震荡冲击力，使小块组织分离成单个而又完整的细胞，经染色后涂于载玻片上进行封固。例如平滑肌分离标本，脊髓的运动神经细胞等。活体标本将所采的观察标本加生理盐水后直接滴于载玻片上在显微镜下观察。整装标本①将胚胎或小动物经前期固定后整体封藏于盛满固定剂的透明容器中。②将发育至某一阶段的鸡胚整体取出，经固定、染色、脱水、透明后封固于载玻片上的标本。血管注射标本①将有色物质注射进血管，用酸或硷将血管周围的组织腐蚀后做成的整体封藏的血管标本。②将有色物质注射进血管后，经一系列制片技术处理后封固于载玻片上供显微镜下观察的标本。组织切片法利用化学试剂将组织经过一系列的固定、脱水、透明后，再利用石蜡、火棉胶或者明胶等支持物渗透进组织内部，使组织保持一定的硬度，并包埋成块，然后依靠切片机将包埋好的组织块切成以微米计的薄片，再根据需要进行各种染色得到的供显微镜下观察的标本的方法。组织切片法的种类冰冻切片石蜡切片、火棉胶切片、明胶切片冰冻切片将所取材的新鲜组织，经快速冷冻后再切片，以保持组织内所含的脂类或某些酶类的活性。为观察急待结果的组织，如临床手术所取组织，也可用这种方法。取材→2.固定和固定后处理→3.脱水→4.透明→5.浸蜡与包埋→6.切片→01染色→8.封固02组织切片标本制作的基本程序:取材一、动物的处死手法迅速、快捷。常用方法：1.麻醉法：吸入麻醉（乙醚）和注射麻醉（乌拉坦或者戊巴比妥）。2.空气栓塞法：耳静脉，20－30ml空气3.击头法：重物猛击，迅速致死。4.颈椎脱臼法：小白鼠5.破坏脑和脊髓：金属探针，蛙6.股动脉放血：麻醉后放血使大动物迅速死亡。选择取材部位选择动物选择切面方向二、取材的步骤01应根据实验工作的目的和经济能力选择实验动物02肝脏—猪肝03卵巢—猫04胃—狗05运动终板—爬虫类动物06肥大细胞—大、小白鼠的皮下组织07间皮和内皮—蛙的肠系膜根据器官组织的结构特点选择取材部位胰腺—胰尾部脊髓的运动神经元—颈膨大和腰膨大处肺—肺门胃—胃底部根据器官组织的结构特点选择取材时切面的方向肾脏—肾门处作纵切头皮—顺毛根的方向纵切大小肠的环行皱襞—纵切气管和食管—横切215组织新鲜：取材动作快捷，迅速投入固定